我做的是一个药物在脑组织的分布，用的处理方法就是2倍的乙腈沉蛋白，高速离心，过滤膜，HPLC分析。但是在寻找内标时，由于我分析的药物的极性非常小，药物的出峰位置很靠后，而药物前面的色谱图又很不干净，几乎没有位置可以插内标。我试过用SPE处理，由于我的药物挥发性强，且进入脑组织的量又小，回收率很低。
所以有没有那位大侠可以为我指点一下迷津！万分感谢！
再有一个问题就是，现在我的药物的色谱峰出也有干扰。我用的C18柱，出峰时间已经是19min了。还是分不开。
换MS试试吧
除了换MS，还有其他方法吗？我们实验室的条件有限，还不能测质谱。
可以考虑采用有机溶剂提取的方法，通常采用提取后氮气吹干，相比用沉淀法，药物浓度可以提高。其次，提取法，相对来说血浆内源性物质可能会少些，你可以试试不同的处理方法。
对于内标物的选择，除了书本上介绍的选择方法，其实大部分还是靠经验积累，项目做多了，对于内标物的选择，可能就相对容易选择出来。实践比较重要，在于积累。
谢谢高人的指导，我已经试过了。但是只是消除了前面的一些干扰，后面的还是不行啊。
所有内标都试过吗？
1.极性小的药物，用乙醚萃取比较好，而且萃取后的乙醚，很容易就被氮气吹干了
2.根据你的药物性质，酸性的药物就在萃取时加点酸，有利于你的药物形成分子后被萃取，碱性同理。
3.至于你说的没找到内标，我建议你这么做：按照你的流动相组成，先查查文献看看这种组成下通常都测定哪些药物，然后选择几个能够搞的到的药物试试看能否做内标。
4.通常用液液萃取后，色谱图中的杂质比你原来的方法会少很多。
多谢啦！受益匪浅啊。
提醒一下，选内标的话，要选结构类似物，不然即使没有干扰，也没有意义
对你的说存在异议，内标物的选择可以不用是结构类似的物质，它只是起到样品处理和分析期间纠正实验变异。能找到结构类似物做内标也可以，不是结构类似物的做内标也可以。
Internal standard
Test compound(s) (e.g. a structurally similar analogue, or stable isotope labelled compound) added to calibration standards, QC samples and study samples at a known and constant concentration to correct for experimental variability during sample preparation and analysis.
欢迎讨论！内标真的是必须要用结构类似物，最好是同位素标记的化合物。你的引用里正好也提到了这一点：e.g. a structurally similar analogue, or stable isotope labelled compound。
因为如果不是结构类似物的话，无法overcome实验的误差以及仪器的波动。事实上，有些人是用的非类似物，但是这样的结果认可度不高，发paper很可能被拒。
内标只是为了克服或纠正试验偏差，至于是不是一定要是类似物，没有硬性规定，可以是类似物也可以不是类似物。那英文提到的是举例而已。我的意思是说内标可以是类似物，也可以不是。我曾经做药代和等效性试验，用的内标也没有完全是类似物，报上去也没人说不可以用这非类似物内标。
我想问的是你一定要选类似物是何目的，选其他的非类似物为什么不可以呢？说出你的理由。
个人觉得你还没有真正的弄明白生物样本分析检测，为什么要加内标来进行。
为什么不是结构类似的内标就无法克服试验误差和仪器的波动？请给出理由。
内标的选择首先要不干扰药物检测，空白血浆不干扰内标，其次内标在血浆样品中的提取回收率比较稳定且其在血浆样品中稳定性很好，最后内标的出峰时间比较合适，我觉得就可以当内标使用，不一定非得是其类似物。
前辈说的有道理，不过楼下说的也对，能找到结构类似的化合物做内标固然好，不过是在找不到的话，有内标还是比没有的好。很悲剧的是，我现在这样的内标都没有找到呢，不知道这题还能不能结了。我要毕业的啊……
所以有没有那位大侠可以为我指点一下迷津！万分感谢！
再有一个问题就是，现在我的药物的色谱峰出也有干扰。我用的C18柱，出峰时间已经是19min了。还是分不开。
换MS试试吧
除了换MS，还有其他方法吗？我们实验室的条件有限，还不能测质谱。
可以考虑采用有机溶剂提取的方法，通常采用提取后氮气吹干，相比用沉淀法，药物浓度可以提高。其次，提取法，相对来说血浆内源性物质可能会少些，你可以试试不同的处理方法。
对于内标物的选择，除了书本上介绍的选择方法，其实大部分还是靠经验积累，项目做多了，对于内标物的选择，可能就相对容易选择出来。实践比较重要，在于积累。
谢谢高人的指导，我已经试过了。但是只是消除了前面的一些干扰，后面的还是不行啊。
所有内标都试过吗？
1.极性小的药物，用乙醚萃取比较好，而且萃取后的乙醚，很容易就被氮气吹干了
2.根据你的药物性质，酸性的药物就在萃取时加点酸，有利于你的药物形成分子后被萃取，碱性同理。
3.至于你说的没找到内标，我建议你这么做：按照你的流动相组成，先查查文献看看这种组成下通常都测定哪些药物，然后选择几个能够搞的到的药物试试看能否做内标。
4.通常用液液萃取后，色谱图中的杂质比你原来的方法会少很多。
多谢啦！受益匪浅啊。
提醒一下，选内标的话，要选结构类似物，不然即使没有干扰，也没有意义
对你的说存在异议，内标物的选择可以不用是结构类似的物质，它只是起到样品处理和分析期间纠正实验变异。能找到结构类似物做内标也可以，不是结构类似物的做内标也可以。
Internal standard
Test compound(s) (e.g. a structurally similar analogue, or stable isotope labelled compound) added to calibration standards, QC samples and study samples at a known and constant concentration to correct for experimental variability during sample preparation and analysis.
欢迎讨论！内标真的是必须要用结构类似物，最好是同位素标记的化合物。你的引用里正好也提到了这一点：e.g. a structurally similar analogue, or stable isotope labelled compound。
因为如果不是结构类似物的话，无法overcome实验的误差以及仪器的波动。事实上，有些人是用的非类似物，但是这样的结果认可度不高，发paper很可能被拒。
内标只是为了克服或纠正试验偏差，至于是不是一定要是类似物，没有硬性规定，可以是类似物也可以不是类似物。那英文提到的是举例而已。我的意思是说内标可以是类似物，也可以不是。我曾经做药代和等效性试验，用的内标也没有完全是类似物，报上去也没人说不可以用这非类似物内标。
我想问的是你一定要选类似物是何目的，选其他的非类似物为什么不可以呢？说出你的理由。
个人觉得你还没有真正的弄明白生物样本分析检测，为什么要加内标来进行。
为什么不是结构类似的内标就无法克服试验误差和仪器的波动？请给出理由。
内标的选择首先要不干扰药物检测，空白血浆不干扰内标，其次内标在血浆样品中的提取回收率比较稳定且其在血浆样品中稳定性很好，最后内标的出峰时间比较合适，我觉得就可以当内标使用，不一定非得是其类似物。
前辈说的有道理，不过楼下说的也对，能找到结构类似的化合物做内标固然好，不过是在找不到的话，有内标还是比没有的好。很悲剧的是，我现在这样的内标都没有找到呢，不知道这题还能不能结了。我要毕业的啊……