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石蜡切片法

时间: 2012-04-18 10:21:01 作者: 来源: 字号:
进行组织学研究,必须把活的组织或器官制作成切片标本,以便在显微镜下进行观察。切片标本也就是利用组织的不同结构,经过染色后呈现出不同的颜色和不同的折光率而制作的。制片的方法众多,但基本要求是尽量保持结构的真相,切成薄的切片,应用不同的染色方法,使内部结构清晰易见。

 石蜡切片法是最常用的一种制片法。其制作过程是:取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→烤片→脱蜡→复水→染色→脱水→透明→封藏。现分述如下:

1、取材和固定:

固定的目的在于保存组织内细胞原有的结构和形态,使其与生活时相似,因此要求固定的材料越新鲜越好。把动物杀死后应立即割取组织块,并快速投入固定液中。

将蛙或小白鼠快速剪去头部,打开腹腔,用锐利的刀片割取小块组织(肝、肠等)。组织块的大小以厚度不超过5mm为宜。然后,将取下的组织块迅速投入Bouin氏固定液中。固定时间为数小时至24小时(需视组织块的大小而定)。

2、冲洗:

经固定的材料,可根据不同的固定液,分别用水或酒精冲洗,以洗去固定液,否则固定液留在组织会有碍染色.

 用Bouin氏液固定的材料,可直接移入70%酒精中,多换几次酒精,直至无黄色时为止。也可在酒精中加入几滴氨水或饱和碳酸锂溶液,以迅速洗去黄色。但留少许黄色也无妨碍。

 浸洗后的材料若暂时不制片,可保存于70%酒精中。

3、脱水:

 柔软并含有多量水分的组织是易切成薄片的,故必须增加组织的硬度。石蜡切片法就是使石蜡渗入组织,以达到支持增硬的作用。但水与石蜡是不相混合的,因此,在浸蜡、包埋前须将组织中的水分完全除去,这一步骤即为脱水。

 常用的脱水剂是酒精。脱水时,先从低浓度的酒精开始,然后,递增浓度,直至无水酒精。具体方法是,将材料经70%酒精→80%酒精→95%酒精(Ⅰ)→95%酒精(Ⅱ)→无水酒精(Ⅰ)→无水酒精(Ⅱ),各级酒精1-2小时。脱水应彻底,否则材料不能透明,影响石蜡的浸入,致使难以切片。

4、透明:

酒精与石蜡不能混和,因此,脱水后的材料在浸蜡前,还必须经过透明。透明剂既可替代组织中的酒精,又能溶解石蜡,以利石蜡的渗入。二甲苯是常用的一种透明剂。

将脱水后的材料经1:1无水酒精与二甲苯→二甲苯(Ⅰ)→二甲苯(Ⅱ),各级时间为0.5-2小时,务使组织达到透明为止。

5、浸蜡:

 将已透明的材料移入熔化的石蜡内浸渍即为浸蜡。其目的是去除组织中的透明剂,而使石蜡渗入整个组织,获得一定的硬度和韧度,以便切成薄的切片。

先将装有56-58℃石蜡的三个蜡杯放在熔蜡箱内熔化,并使熔蜡箱的温度保持恒定(约58℃),切勿太高或太低。 然后将透明了的材料放入蜡杯(Ⅰ)→蜡杯(Ⅱ)→蜡杯(Ⅲ)。浸蜡时间视材料大小而定,一般总的浸蜡时间为2-4小时左右。

6、包埋:

 将浸蜡后的材料包埋于石蜡中,并使它凝固成蜡块,这一过程称为包埋。

 包埋前,视组织块的大小先将绘图纸折成一纸盒,作为包埋的容器。纸盒折法如下:先折1、2线,次折3、4线,然后使ab两折重叠,向外折出5线;同法折出6线,再折c线。最后依同法折出7、8线及d线即成。

将纸盒盛满已熔化的石蜡,随即将第三杯中已浸蜡的材料放入其中,应注意切面朝下,位置放正。然后速将纸盒半浸于冷水中,待石蜡表面凝结后,将纸盒全部浸入水中冷却。石蜡全部凝固后,拆去纸盒即成蜡块。  3    1 2 3 下一页 尾页
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