细菌内毒素检查讨论
虽然仅仅是药物检查的一个方面，往往被大家所忽视，但在实际过程中，出现的问题却很多，那些药物适合用细菌内毒素检查，那些药物适合用热源检查。可以讨论下面几个方面：
1.供试品溶液的制备方法；
2.细菌内毒素检查方法的建立，方法学验证需要注意的地方；
3.由于药品说明书中的用量、滴定时间说得不明确，那么细菌内毒素限度的如何确定，如何计算，注射液、冻干粉针等有什么区别；
4.如何确定供试品溶液有无干扰；
5.举列说明您在现实工作中遇到的问题，是如何解决的?
同时征集本话题的主持人！欢迎参加！欢迎大家整理这方面的讨论，我们将给予一定的鼓励，谢谢！
请大家熟读中国药典2005年版及2000版！
再检索相关文献！
结合工作实际！
根据临床需要！结合品种特点！
在版主的指引下，畅所欲言！
我是这样做内毒素的，一直这么做，自己也不知道有什么硬伤，好久不做注射剂，都有点忘了，现在正好温习一下。如有不对的地方请多指教。
1.限值L的确定
主要根据说明书来，具体计算药典中有详细的介绍，注射液和冻干分针一般需要考虑联合用药，如无滴定时间限制一般以一小时来计算。
按照体表面积来算的品种需要 体重与体表面积换算表
计算出的数值根据品种情况及自己制剂情况从严处理即可。有2-3个品种因为限度不够严格而被非书面发布。
2.最大非干扰稀释倍数的确定
根据市售鲎试剂计算，一般0.5EU/ML，0.25EU/ML，0.125EU/ML，0.06EU/ML，0.03EU/ML
L/λ（L/0.5～L/0.03）计算出最小和最大大非干扰倍数来。以L=50EU/ML来计算即100～1600倍。
3.最大非干扰浓度的测定
预试验应该从 最小非干扰浓度到最大非干扰浓度之间的全部进行试验。如原液、稀释100 、稀释200、稀释 400、稀释 800、稀释 1600分别对应鲎试剂的0.5EU/ML，0.25EU/ML，0.125EU/ML，0.06EU/ML，0.03EU/ML。
4.干扰试验
建议选用比最大非干扰浓度稀释倍数更大的浓度，即选用更灵敏的鲎试剂。
5.检测
按照药典要求进行即可。
一些注意：
1.找个好的房间，干净，最好不要有人。
2.备足足够的移液管，每个管标清楚是做什么的，如果忘记了就不要接着用。
3.每次稀释一定要在旋涡混合器上充分混合好。
另外我一次做内毒素的经历：
一次做细菌内毒素的时候,做了好多次都没有得到好的结果,阳性不呈阳性!
做完鲎试剂复核后,开始检测样品;
1.最先PPC不成阳性|样品干扰?|,因此做干扰实验(由于作过这个品种的大输液,因此未做干扰,但小针加入了大量的助溶剂),做干扰实验的时候,全部阴性|操作失误?|.......
/******上午准备实验,中午开始做,做样品时已经有点晚,做干扰实验时已经很晚******/
2.第二天继续进行试验 做预干扰实验吧,结果是所选浓度不干扰.
进行干扰试验,一切正常,做样品检测,PC成阳性,PPC仍不成阳性.郁闷啊!>_<!~
3.查资料,实验注意中要求的都做到了,并且操作无明显错误,为什么呢,百思不得其解,一阵凉风刮来,好冷啊,,,会不会是温度,并没有教材提到室内温度的影响.
前天2-12℃,昨天5-15度,今天更冷,开暖风机,开空调,室内温度达到18度,直接进行样品检测,完全符合规定.........
通过以上实验经历,做内毒素的室内温度需要至少15℃,或者更高.像我们这样实验条件不好达不到室温的实验室,一定要注意温度...对试验的影响.
想的全才能少走弯路,做试验最怕反复~~~
1. 好象最大稀释倍数只适合与制药,不适合于医疗器械
2. 不知道各位在做注射用水时,你们一般是用多少灵敏度的鲎试剂
3- 有个问题一直不解,在做鲎试剂灵敏度的符合实验时,为什么在做平行4管平行时,应该是4管都是呈阴性或阳性啊,怎么会出现阴性和阳性都有呢,
说得好
请大家继续讨论！如果有热心站友能够积极参与讨论并对讨论作出一定的总结，斑竹将给与一定的奖励！
脂多糖是自然界中活性相当高的一大类物质，如果不考虑其所带来的影响，药理活性及其它指标的研究将会出现偏差，这恰恰是国内很多研究者所忽视的。同时，大家应当注意，鲎试剂目前对多糖类产品存在假阳性现象，从事相关产品研发和检验的可以参考USP相应方法进行检测，如有必要可以结合兔法进行验证
“走进时间的沼泽 ”说“鲎试剂目前对多糖类产品存在假阳性现象。”
当检测的样品中存在如（1，3）-β-D葡聚糖等能引起G因子旁路反应时，就会使样品检测受到干扰，这时就不能使用普通鲎试剂来检测，而要使用特异性鲎试剂（去除G因子鲎试剂）来检测样品.国内早就有这种鲎试剂了。
特异性鲎试剂及其鉴定.doc(28.5k)
根据上个月省所检查提出的问题谈谈我的理解。
省所认为我们做的试验供试品阳性对照溶液稀释有误。
我们一直是用供试品终浓度来稀释细菌内毒素工作标准品，省所老师认为这样做不对，无法计算出最后试验液中供试品浓度。应该用2倍供试品终浓度来1：1稀释4λ细菌内毒素工作对照品，这样就能得到2λ供试品阳性对照溶液。
实际上我认为两种方法都是可以的。第一种方法，是常规方法，因为一般细菌内毒素工作标准品浓度都在100EU以上，而一般试验用鲎试剂的浓度为0.25EU/ML，0.125EU/ML，经过上百倍的稀释，最后2λ供试品阳性对照溶液含供试品浓度已很接近供试品浓度。(以100倍分两次10：1稀释为例：第一部稀释后浓度C1=9/10×C=0.9C；第二部稀释后C2=(0.9C+9C)10=0.99C)
而第二种方法实际上是第一种方法的简便方法，在实际工作中用第 二种方法无疑会使操作简单，是值得提倡的。 2 1 2 下一页 尾页
虽然仅仅是药物检查的一个方面，往往被大家所忽视，但在实际过程中，出现的问题却很多，那些药物适合用细菌内毒素检查，那些药物适合用热源检查。可以讨论下面几个方面：
1.供试品溶液的制备方法；
2.细菌内毒素检查方法的建立，方法学验证需要注意的地方；
3.由于药品说明书中的用量、滴定时间说得不明确，那么细菌内毒素限度的如何确定，如何计算，注射液、冻干粉针等有什么区别；
4.如何确定供试品溶液有无干扰；
5.举列说明您在现实工作中遇到的问题，是如何解决的?
同时征集本话题的主持人！欢迎参加！欢迎大家整理这方面的讨论，我们将给予一定的鼓励，谢谢！
请大家熟读中国药典2005年版及2000版！
再检索相关文献！
结合工作实际！
根据临床需要！结合品种特点！
在版主的指引下，畅所欲言！
我是这样做内毒素的，一直这么做，自己也不知道有什么硬伤，好久不做注射剂，都有点忘了，现在正好温习一下。如有不对的地方请多指教。
1.限值L的确定
主要根据说明书来，具体计算药典中有详细的介绍，注射液和冻干分针一般需要考虑联合用药，如无滴定时间限制一般以一小时来计算。
按照体表面积来算的品种需要 体重与体表面积换算表
计算出的数值根据品种情况及自己制剂情况从严处理即可。有2-3个品种因为限度不够严格而被非书面发布。
2.最大非干扰稀释倍数的确定
根据市售鲎试剂计算，一般0.5EU/ML，0.25EU/ML，0.125EU/ML，0.06EU/ML，0.03EU/ML
L/λ（L/0.5～L/0.03）计算出最小和最大大非干扰倍数来。以L=50EU/ML来计算即100～1600倍。
3.最大非干扰浓度的测定
预试验应该从 最小非干扰浓度到最大非干扰浓度之间的全部进行试验。如原液、稀释100 、稀释200、稀释 400、稀释 800、稀释 1600分别对应鲎试剂的0.5EU/ML，0.25EU/ML，0.125EU/ML，0.06EU/ML，0.03EU/ML。
4.干扰试验
建议选用比最大非干扰浓度稀释倍数更大的浓度，即选用更灵敏的鲎试剂。
5.检测
按照药典要求进行即可。
一些注意：
1.找个好的房间，干净，最好不要有人。
2.备足足够的移液管，每个管标清楚是做什么的，如果忘记了就不要接着用。
3.每次稀释一定要在旋涡混合器上充分混合好。
另外我一次做内毒素的经历：
一次做细菌内毒素的时候,做了好多次都没有得到好的结果,阳性不呈阳性!
做完鲎试剂复核后,开始检测样品;
1.最先PPC不成阳性|样品干扰?|,因此做干扰实验(由于作过这个品种的大输液,因此未做干扰,但小针加入了大量的助溶剂),做干扰实验的时候,全部阴性|操作失误?|.......
/******上午准备实验,中午开始做,做样品时已经有点晚,做干扰实验时已经很晚******/
2.第二天继续进行试验 做预干扰实验吧,结果是所选浓度不干扰.
进行干扰试验,一切正常,做样品检测,PC成阳性,PPC仍不成阳性.郁闷啊!>_<!~
3.查资料,实验注意中要求的都做到了,并且操作无明显错误,为什么呢,百思不得其解,一阵凉风刮来,好冷啊,,,会不会是温度,并没有教材提到室内温度的影响.
前天2-12℃,昨天5-15度,今天更冷,开暖风机,开空调,室内温度达到18度,直接进行样品检测,完全符合规定.........
通过以上实验经历,做内毒素的室内温度需要至少15℃,或者更高.像我们这样实验条件不好达不到室温的实验室,一定要注意温度...对试验的影响.
想的全才能少走弯路,做试验最怕反复~~~
1. 好象最大稀释倍数只适合与制药,不适合于医疗器械
2. 不知道各位在做注射用水时,你们一般是用多少灵敏度的鲎试剂
3- 有个问题一直不解,在做鲎试剂灵敏度的符合实验时,为什么在做平行4管平行时,应该是4管都是呈阴性或阳性啊,怎么会出现阴性和阳性都有呢,
说得好
请大家继续讨论！如果有热心站友能够积极参与讨论并对讨论作出一定的总结，斑竹将给与一定的奖励！
脂多糖是自然界中活性相当高的一大类物质，如果不考虑其所带来的影响，药理活性及其它指标的研究将会出现偏差，这恰恰是国内很多研究者所忽视的。同时，大家应当注意，鲎试剂目前对多糖类产品存在假阳性现象，从事相关产品研发和检验的可以参考USP相应方法进行检测，如有必要可以结合兔法进行验证
“走进时间的沼泽 ”说“鲎试剂目前对多糖类产品存在假阳性现象。”
当检测的样品中存在如（1，3）-β-D葡聚糖等能引起G因子旁路反应时，就会使样品检测受到干扰，这时就不能使用普通鲎试剂来检测，而要使用特异性鲎试剂（去除G因子鲎试剂）来检测样品.国内早就有这种鲎试剂了。
特异性鲎试剂及其鉴定.doc(28.5k)根据上个月省所检查提出的问题谈谈我的理解。
省所认为我们做的试验供试品阳性对照溶液稀释有误。
我们一直是用供试品终浓度来稀释细菌内毒素工作标准品，省所老师认为这样做不对，无法计算出最后试验液中供试品浓度。应该用2倍供试品终浓度来1：1稀释4λ细菌内毒素工作对照品，这样就能得到2λ供试品阳性对照溶液。
实际上我认为两种方法都是可以的。第一种方法，是常规方法，因为一般细菌内毒素工作标准品浓度都在100EU以上，而一般试验用鲎试剂的浓度为0.25EU/ML，0.125EU/ML，经过上百倍的稀释，最后2λ供试品阳性对照溶液含供试品浓度已很接近供试品浓度。(以100倍分两次10：1稀释为例：第一部稀释后浓度C1=9/10×C=0.9C；第二部稀释后C2=(0.9C+9C)10=0.99C)
而第二种方法实际上是第一种方法的简便方法，在实际工作中用第 二种方法无疑会使操作简单，是值得提倡的。 2 1 2 下一页 尾页