各位朋友，我遇到难题了。手里有药物，目的是选择或者建立模型筛选出能够破坏肿瘤血管的化合物。
因为药物量有限，而且种类多，所以想先通过体外模型初步筛选，然后进入体内。但是“肿瘤血管破坏剂”体外模型如何构建？
是的，肿瘤血管抑制剂模型是不是可以拿来更改下然后评价我手中的药？
这点我考虑过，血管抑制剂模型大多数是通过体外培养血管内皮细胞在特定载体上(matrigel)，评价药物对其迁移、渗透、管道形成的抑制能力来评价，但是我需要通过评价化合物破坏"已经形成血管"的活性来判定药效。所以，血管抑制剂模型有好多不适用。
目前，调研文献后，想将血管抑制剂模型中的“鸡胚绒毛尿囊膜”实验借鉴过来，不知是否可行？知道的朋友请回复。
另外，体外实验，我想买HUVECs细胞(人脐静脉血管内皮细胞)，让该细胞在普通的细胞微孔板中长成体内血管的形状，给药后，用免疫荧光方法标记内皮细胞的CD-31，然后用特定软件定量给药组血管破坏率。同样，请知道的朋友倾情指点，有相似文献连接也好。
其实，最关键的问题是如何让HUVECs细胞在普通细胞微孔板上长出血管状，且能够定性或者定量血管的破坏情况。用matrigel做载体的话细胞会向胶深层发展，不做切片的话不好定性或者定量。
我很压抑，希望知道的朋友帮帮我。对啦，调研发现好像有transwell小室的模型，不用其它载体，将内皮细胞接种上面，就可以在体外模拟体内血管形状，并且可以用免疫荧光定性(观察)或者定量血管生成率。如果有这回事儿的话，反过来是不是也可以评价药物破坏已经形成的血管的活性？？？高手在哪里？
13718103757@163.com
体外的血管形成和鸡胚尿囊膜我读研究生的时候都做过。
坦率的说，个人认为鸡胚尿囊膜难以实现目的。鸡胚尿囊膜是先将肿瘤细胞种植在尿囊膜上然后培养，几天之后看肿瘤灶及周围血管的形成情况。而你的目的是待血管形成之后再用药物进行干预。最大的问题是时间。适合种植的鸡胚到孵出小鸡的时间一般也就8－9天了不起了(大多7天上下），而肿瘤血管形成就需要好几天，你再干预看已经形成的血管的破坏情况，估计血管破坏情况还没出来你就已经可以吃小鸡了。
体外血管形成，目前好像还是需要你所说的matrigel（模拟细胞外基质），否则很难长好，因为血管必须依附于基质才能长好。
是否可以考虑一下裸鼠，时间够长，可以造模后干预，可以切片看血管
首先，感谢你回复和帮助。
是的，你说的有道理，裸鼠体内实验，不过药量需要相对大些，我手中的药很少，化学合成那帮人又忙着其它项目，我不整出些阳性结果他们好像不太重视(当然，前提是药物确实有效)。我着急啊。
另外，鸡胚绒毛尿囊膜实验，你肯定也清楚，受精卵拿来后37度温箱人工孵育，在第7-12天一般是尿囊膜血管发生阶段，我的想法是：不在尿囊膜接种肿瘤细胞，就是让受精卵正常生长，在第12天血管长得差不多时再开窗将药物置于明胶海绵载体上放于尿囊膜血管密集处，两天后(据报道，上了三期临床后但失败的我这类药的“先祖”作用迅速)看血管破坏率(用Image Pro Plus)。你觉得这样可行吗？
另外，看一些文献和材料，有人用CD31和DAPI标记体外血管的图片，做的很漂亮，谁知道他们是怎么做的？
首先，感谢你回复和帮助。
是的，你说的有道理，裸鼠体内实验，不过药量需要相对大些，我手中的药很少，化学合成那帮人又忙着其它项目，我不整出些阳性结果他们好像不太重视(当然，前提是药物确实有效)。我着急啊。
另外，鸡胚绒毛尿囊膜实验，你肯定也清楚，受精卵拿来后37度温箱人工孵育，在第7-12天一般是尿囊膜血管发生阶段，我的想法是：不在尿囊膜接种肿瘤细胞，就是让受精卵正常生长，在第12天血管长得差不多时再开窗将药物置于明胶海绵载体上放于尿囊膜血管密集处，两天后(据报道，上了三期临床后但失败的我这类药的“先祖”作用迅速)看血管破坏率(用Image Pro Plus)。你觉得这样可行吗？
另外，看一些文献和材料，有人用CD31和DAPI标记体外血管的图片，做的很漂亮，谁知道他们是怎么做的？
如果需要阳性结果，最简单的可能是单纯培养HUVEC，然后干预，看干预后HUVEC的凋亡或者坏死情况。
至于鸡胚，根据我个人的经验，理论不可靠，到不了那么长时间，基本上10天左右甚至更短小鸡就出来了（只要不死，死得满多的）。可能的原因是，当时我们鸡胚不是自己的，是购买的北京的货，对方确认受精，到货到手上需要时间，因此留给自己研究的时间就短了。
如果不用刺激因子或者肿瘤细胞种植，尿囊膜还是有血管形成，但不那么明显，相应的，如果用药物干预，效应也不会明显。同时，从出现较明显的血管形成开始，留给你观察的时间会很短，个人经验不会超过2天鸡胚就变成小鸡了。
至于体外血管标记，我没有做过，具体不是很了解。
学长，十分感谢您的回复和耐心。
我在北京海淀，拿到受精卵应该是方便的，看文献上他们做血管抑制实验时都很”从容“，所以我想能不能改变给药次序，先让血管长起来，然后再给药干预，以此建立方便、快捷的”肿瘤血管破坏剂模型“，从没自己做过。新生鸡胚免疫系统不完善，对药物敏感，这一点类似于肿瘤内部血管，这也是我有此考虑的一个原因。
您说体外接种HUVECs，直接给药做凋亡。这点，我理解您，但是我手中的这类药的”先祖“DMXAA，据文献报道确实有促使肿瘤血管内皮细胞发生凋亡的作用，但同时还有促TNF-alpha等细胞因子释放的作用(机制很不明朗，2008上临床三期，去年底失败于同紫杉醇联用治疗非小细胞肺癌)，也即这类药单靠对内皮细胞凋亡的诱导来设计实验并进行筛选也不太可靠。
我的任务还是：先筛选出，然后再做深一步实验。
听带我的小老师(毕业两年留下的)的设计，先体外初筛出促TNF等细胞因子释放的药，再深一步做。按这个”不靠谱“的设计我做了半年多，硬是伤了我。刚开始我就说DMXAA促TNF释放，不一定所有的结构改造物都能够如此，有可能漏筛或者假阳性，但人家就是不批准我的想法。悲催。 2 1 2 下一页 尾页
因为药物量有限，而且种类多，所以想先通过体外模型初步筛选，然后进入体内。但是“肿瘤血管破坏剂”体外模型如何构建？
是的，肿瘤血管抑制剂模型是不是可以拿来更改下然后评价我手中的药？
这点我考虑过，血管抑制剂模型大多数是通过体外培养血管内皮细胞在特定载体上(matrigel)，评价药物对其迁移、渗透、管道形成的抑制能力来评价，但是我需要通过评价化合物破坏"已经形成血管"的活性来判定药效。所以，血管抑制剂模型有好多不适用。
目前，调研文献后，想将血管抑制剂模型中的“鸡胚绒毛尿囊膜”实验借鉴过来，不知是否可行？知道的朋友请回复。
另外，体外实验，我想买HUVECs细胞(人脐静脉血管内皮细胞)，让该细胞在普通的细胞微孔板中长成体内血管的形状，给药后，用免疫荧光方法标记内皮细胞的CD-31，然后用特定软件定量给药组血管破坏率。同样，请知道的朋友倾情指点，有相似文献连接也好。
其实，最关键的问题是如何让HUVECs细胞在普通细胞微孔板上长出血管状，且能够定性或者定量血管的破坏情况。用matrigel做载体的话细胞会向胶深层发展，不做切片的话不好定性或者定量。
我很压抑，希望知道的朋友帮帮我。对啦，调研发现好像有transwell小室的模型，不用其它载体，将内皮细胞接种上面，就可以在体外模拟体内血管形状，并且可以用免疫荧光定性(观察)或者定量血管生成率。如果有这回事儿的话，反过来是不是也可以评价药物破坏已经形成的血管的活性？？？高手在哪里？
13718103757@163.com
体外的血管形成和鸡胚尿囊膜我读研究生的时候都做过。
坦率的说，个人认为鸡胚尿囊膜难以实现目的。鸡胚尿囊膜是先将肿瘤细胞种植在尿囊膜上然后培养，几天之后看肿瘤灶及周围血管的形成情况。而你的目的是待血管形成之后再用药物进行干预。最大的问题是时间。适合种植的鸡胚到孵出小鸡的时间一般也就8－9天了不起了(大多7天上下），而肿瘤血管形成就需要好几天，你再干预看已经形成的血管的破坏情况，估计血管破坏情况还没出来你就已经可以吃小鸡了。
体外血管形成，目前好像还是需要你所说的matrigel（模拟细胞外基质），否则很难长好，因为血管必须依附于基质才能长好。
是否可以考虑一下裸鼠，时间够长，可以造模后干预，可以切片看血管
首先，感谢你回复和帮助。
是的，你说的有道理，裸鼠体内实验，不过药量需要相对大些，我手中的药很少，化学合成那帮人又忙着其它项目，我不整出些阳性结果他们好像不太重视(当然，前提是药物确实有效)。我着急啊。
另外，鸡胚绒毛尿囊膜实验，你肯定也清楚，受精卵拿来后37度温箱人工孵育，在第7-12天一般是尿囊膜血管发生阶段，我的想法是：不在尿囊膜接种肿瘤细胞，就是让受精卵正常生长，在第12天血管长得差不多时再开窗将药物置于明胶海绵载体上放于尿囊膜血管密集处，两天后(据报道，上了三期临床后但失败的我这类药的“先祖”作用迅速)看血管破坏率(用Image Pro Plus)。你觉得这样可行吗？
另外，看一些文献和材料，有人用CD31和DAPI标记体外血管的图片，做的很漂亮，谁知道他们是怎么做的？
首先，感谢你回复和帮助。
是的，你说的有道理，裸鼠体内实验，不过药量需要相对大些，我手中的药很少，化学合成那帮人又忙着其它项目，我不整出些阳性结果他们好像不太重视(当然，前提是药物确实有效)。我着急啊。
另外，鸡胚绒毛尿囊膜实验，你肯定也清楚，受精卵拿来后37度温箱人工孵育，在第7-12天一般是尿囊膜血管发生阶段，我的想法是：不在尿囊膜接种肿瘤细胞，就是让受精卵正常生长，在第12天血管长得差不多时再开窗将药物置于明胶海绵载体上放于尿囊膜血管密集处，两天后(据报道，上了三期临床后但失败的我这类药的“先祖”作用迅速)看血管破坏率(用Image Pro Plus)。你觉得这样可行吗？
另外，看一些文献和材料，有人用CD31和DAPI标记体外血管的图片，做的很漂亮，谁知道他们是怎么做的？
如果需要阳性结果，最简单的可能是单纯培养HUVEC，然后干预，看干预后HUVEC的凋亡或者坏死情况。
至于鸡胚，根据我个人的经验，理论不可靠，到不了那么长时间，基本上10天左右甚至更短小鸡就出来了（只要不死，死得满多的）。可能的原因是，当时我们鸡胚不是自己的，是购买的北京的货，对方确认受精，到货到手上需要时间，因此留给自己研究的时间就短了。
如果不用刺激因子或者肿瘤细胞种植，尿囊膜还是有血管形成，但不那么明显，相应的，如果用药物干预，效应也不会明显。同时，从出现较明显的血管形成开始，留给你观察的时间会很短，个人经验不会超过2天鸡胚就变成小鸡了。
至于体外血管标记，我没有做过，具体不是很了解。
学长，十分感谢您的回复和耐心。
我在北京海淀，拿到受精卵应该是方便的，看文献上他们做血管抑制实验时都很”从容“，所以我想能不能改变给药次序，先让血管长起来，然后再给药干预，以此建立方便、快捷的”肿瘤血管破坏剂模型“，从没自己做过。新生鸡胚免疫系统不完善，对药物敏感，这一点类似于肿瘤内部血管，这也是我有此考虑的一个原因。
您说体外接种HUVECs，直接给药做凋亡。这点，我理解您，但是我手中的这类药的”先祖“DMXAA，据文献报道确实有促使肿瘤血管内皮细胞发生凋亡的作用，但同时还有促TNF-alpha等细胞因子释放的作用(机制很不明朗，2008上临床三期，去年底失败于同紫杉醇联用治疗非小细胞肺癌)，也即这类药单靠对内皮细胞凋亡的诱导来设计实验并进行筛选也不太可靠。
我的任务还是：先筛选出，然后再做深一步实验。
听带我的小老师(毕业两年留下的)的设计，先体外初筛出促TNF等细胞因子释放的药，再深一步做。按这个”不靠谱“的设计我做了半年多，硬是伤了我。刚开始我就说DMXAA促TNF释放，不一定所有的结构改造物都能够如此，有可能漏筛或者假阳性，但人家就是不批准我的想法。悲催。 2 1 2 下一页 尾页