小弟一个月前开始接触血管环试验。买了南京美易的仪器。然后按照文献的说法做了四次试验，我做的是大鼠胸主动脉。平衡后，发现加入60mmol/lKCl，血管几乎没有反应。不知道问题出在哪里。还请各位大侠指教一二。
1 我用的K-H液：mmol/l. Nacl: 118 KCl: 4.7 NaH2PO4: 1.2 MgSO4.7H20：1.2 葡萄糖：10 Cacl2:1.25 NaHCO3: 25 PH=7.4. 是否有问题？
2 我试验大致流程：将营养液放入水浴，同时通医用氧气30min, 然后取出50ml, 放入冰箱制冷，用作分离血管。处死大鼠，取出胸主动脉，将冷的K-H液倒入表面皿，置于冰上，然后开始分离胸主动脉。血管挂号后，给予2g预张力，平衡1小时，加入60mmol/l KCl。
还请大家指教，小弟感激不尽。
是不是你分的血管死了。
谢谢楼上，今天我再试一次
再试了一次，还是没有成功。不过这次轻了点，比上次强了点
各位大侠再给些建议啊！！！！
取主动脉时注意不要牵拉血管；分离外膜时温柔点；去除内皮时不要太狠了。一言以蔽之，挂血管之前要绝对避免对血管环的牵拉，哪怕是一点点。
处死大鼠可过量麻醉或断头，切勿脱臼处死，那样会对牵拉血管，损坏其反应性。
管径越大的血管越脆弱，每个环节都要小心，一般深度麻醉后，直接开胸开腹，剪开腹主动脉下端，预先准备好温生理盐水注射器，穿刺左心室，缓慢注射冲洗主动脉，快速容易损害内皮，血凝块也会影响内皮功能，冲洗完后迅速取出主动脉，不要夹持太多组织，放入通氧的培养皿中，当然要有KH液体，去除血管旁脂肪，脂肪含有血管舒张因子，不去除干净也会影响收缩反应的，整个过程中尤其注意不要缺氧缺液，也不要机械损害血管。还有就是主动脉收缩反应很差的，不要期望它收缩会很好，可以把标尺调一下，这样可以看到更明显的收缩反应。主动脉做血管有一定局限性，阻力血管收缩反应会很好，不过那个得用DMT做，慢慢练习吧，有个过程。
1、分离胸主动脉的时候，用冷的K-H液即可，没必要再放冰上。我们平常做的时候，K-H液也不预冷。2、“平衡1h”，通气及换液情况如何？3、“加入60 mM的KCl”，准确的说，是血管环或条浴在含60 mM的K-H液中；4、用温度计测量一下你的水浴温度到底是多少？
1、取血管的时候最好保证心脏依旧是跳动状态，血管的活性会好一些，取血管要快，尽量避免凝血导致形成血栓，要不血管不容易养活。
2、取出的胸主动脉要放在已经冰好的营养液中一般就行吧，可以不用放在冰上通气的时候可以考虑
3、预张力一开始的话是不是可以考虑别给那么大，我们平时做兔子一般也只给到1-1.5
4、不知道你的实验仪器具体怎么样，曾经听师姐说一起可以微调的话，大鼠血管条成活的几率大些
5、可以考虑氧气与二氧化碳成一定比例通气，这样能维持酸碱度
最近在做小鼠的主动脉，做新福林的量效曲线也做的也不怎么好，我的最大反应只有之前的2/3(组里实验师的结果)。遇到瓶颈，郁闷中啊！
做过的战友用的RT多大呢？我用的EMKA的仪器。
其他的问题没看出来，我只说，同志，您给的预张力太大了！！！！
我原来用的是0.5g，平衡30min-1h。之后就可以了，我一个血管可以很好的活一天呢，至少也有4-5个小时吧
1 我用的K-H液：mmol/l. Nacl: 118 KCl: 4.7 NaH2PO4: 1.2 MgSO4.7H20：1.2 葡萄糖：10 Cacl2:1.25 NaHCO3: 25 PH=7.4. 是否有问题？
2 我试验大致流程：将营养液放入水浴，同时通医用氧气30min, 然后取出50ml, 放入冰箱制冷，用作分离血管。处死大鼠，取出胸主动脉，将冷的K-H液倒入表面皿，置于冰上，然后开始分离胸主动脉。血管挂号后，给予2g预张力，平衡1小时，加入60mmol/l KCl。
还请大家指教，小弟感激不尽。
是不是你分的血管死了。
谢谢楼上，今天我再试一次
再试了一次，还是没有成功。不过这次轻了点，比上次强了点
各位大侠再给些建议啊！！！！
取主动脉时注意不要牵拉血管；分离外膜时温柔点；去除内皮时不要太狠了。一言以蔽之，挂血管之前要绝对避免对血管环的牵拉，哪怕是一点点。
处死大鼠可过量麻醉或断头，切勿脱臼处死，那样会对牵拉血管，损坏其反应性。
管径越大的血管越脆弱，每个环节都要小心，一般深度麻醉后，直接开胸开腹，剪开腹主动脉下端，预先准备好温生理盐水注射器，穿刺左心室，缓慢注射冲洗主动脉，快速容易损害内皮，血凝块也会影响内皮功能，冲洗完后迅速取出主动脉，不要夹持太多组织，放入通氧的培养皿中，当然要有KH液体，去除血管旁脂肪，脂肪含有血管舒张因子，不去除干净也会影响收缩反应的，整个过程中尤其注意不要缺氧缺液，也不要机械损害血管。还有就是主动脉收缩反应很差的，不要期望它收缩会很好，可以把标尺调一下，这样可以看到更明显的收缩反应。主动脉做血管有一定局限性，阻力血管收缩反应会很好，不过那个得用DMT做，慢慢练习吧，有个过程。
1、分离胸主动脉的时候，用冷的K-H液即可，没必要再放冰上。我们平常做的时候，K-H液也不预冷。2、“平衡1h”，通气及换液情况如何？3、“加入60 mM的KCl”，准确的说，是血管环或条浴在含60 mM的K-H液中；4、用温度计测量一下你的水浴温度到底是多少？
1、取血管的时候最好保证心脏依旧是跳动状态，血管的活性会好一些，取血管要快，尽量避免凝血导致形成血栓，要不血管不容易养活。
2、取出的胸主动脉要放在已经冰好的营养液中一般就行吧，可以不用放在冰上通气的时候可以考虑
3、预张力一开始的话是不是可以考虑别给那么大，我们平时做兔子一般也只给到1-1.5
4、不知道你的实验仪器具体怎么样，曾经听师姐说一起可以微调的话，大鼠血管条成活的几率大些
5、可以考虑氧气与二氧化碳成一定比例通气，这样能维持酸碱度
最近在做小鼠的主动脉，做新福林的量效曲线也做的也不怎么好，我的最大反应只有之前的2/3(组里实验师的结果)。遇到瓶颈，郁闷中啊！
做过的战友用的RT多大呢？我用的EMKA的仪器。
其他的问题没看出来，我只说，同志，您给的预张力太大了！！！！
我原来用的是0.5g，平衡30min-1h。之后就可以了，我一个血管可以很好的活一天呢，至少也有4-5个小时吧