为什么我的重现性差？菜鸟问题
血浆样品的前处理
1.5ml EP管中 50微升内标(乙腈溶) 加入50微升标液（甲醇溶液） 涡旋3min 加入血浆100微升 乙腈500微升沉淀蛋白 涡旋 3min 高速离心10min（12000rpm）
定量取600微升上清 至10ml 塑料管中 空气流下 40℃水浴吹干 MP 100微升复溶 进针20微升
色谱柱为 C18柱 4.6mm *250 mm
流动相为乙腈：水 40 ：60 水相含 5mmol 醋酸铵 流速为0.5ml / min
用ESI离子源 MRM方式定量
问题是：结果的重现性差（同一个浓度点的两个样品测得的峰面积的RSD偏差大）
我每次提两条标曲，总共7个浓度点（从20ng/ml 到 0.2ng/ml，共14个样品） 其中随机有3个浓度点的峰面积偏差很小，但另外4个点的两个样品之间的偏差有40%（如一个是+20%，另一个是-20%），不合格，同时峰面积与线性不成比例，数据很糟糕。
我试了将混标（预先混合的标液和内标溶液）进行血样处理提取，发现同一浓度的样品RSD的偏差很小（小于5%），证明我的样品处理方法是没有问题的，，误差不是来自样品处理，同时仪器对该药物的响应很稳定。
所以怀疑是没有将标液和内标混匀，所以导致了误差。改进了一下处理方法，我的标液和内标加入后（50+50），先将这100微升溶液在超声 10秒中左右，然后再涡旋3 min
结果这次标曲的情况为 其中浓度的3个点重现性很好，另外4个点的偏差很大 30%，不合格，但整体的偏差要比此前减小，同时峰面积呈比例，线性系数达到0.989 3 1 2 3 下一页 尾页
血浆样品的前处理
1.5ml EP管中 50微升内标(乙腈溶) 加入50微升标液（甲醇溶液） 涡旋3min 加入血浆100微升 乙腈500微升沉淀蛋白 涡旋 3min 高速离心10min（12000rpm）
定量取600微升上清 至10ml 塑料管中 空气流下 40℃水浴吹干 MP 100微升复溶 进针20微升
色谱柱为 C18柱 4.6mm *250 mm
流动相为乙腈：水 40 ：60 水相含 5mmol 醋酸铵 流速为0.5ml / min
用ESI离子源 MRM方式定量
问题是：结果的重现性差（同一个浓度点的两个样品测得的峰面积的RSD偏差大）
我每次提两条标曲，总共7个浓度点（从20ng/ml 到 0.2ng/ml，共14个样品） 其中随机有3个浓度点的峰面积偏差很小，但另外4个点的两个样品之间的偏差有40%（如一个是+20%，另一个是-20%），不合格，同时峰面积与线性不成比例，数据很糟糕。
我试了将混标（预先混合的标液和内标溶液）进行血样处理提取，发现同一浓度的样品RSD的偏差很小（小于5%），证明我的样品处理方法是没有问题的，，误差不是来自样品处理，同时仪器对该药物的响应很稳定。
所以怀疑是没有将标液和内标混匀，所以导致了误差。改进了一下处理方法，我的标液和内标加入后（50+50），先将这100微升溶液在超声 10秒中左右，然后再涡旋3 min
结果这次标曲的情况为 其中浓度的3个点重现性很好，另外4个点的偏差很大 30%，不合格，但整体的偏差要比此前减小，同时峰面积呈比例，线性系数达到0.989 3 1 2 3 下一页 尾页