大家好!
我在做药代中药物的提取回收率,看了一些文献,但提取回收率的做法不一,所以想请教大家给予正确的做法。
我是这样做提取回收率的,不知是否正确,做法如下:1.取一个浓度的标准溶液(比如8ug/ml的标准液)100ul,加入空白血浆0.5ml,再加内标50ul,加少量磷酸后,涡旋混匀。然后加入3ml的乙酸乙酯进行萃取,涡旋3min,离心(4000r/min)10min,取一定量的上清液,在45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A1、A2,R1=A1/A2。 2. 另取8ug/ml的标准液100ul,再加内标50ul,混匀后于45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A3、A4,R2=A3/A4 。
提取回收率的计算如下:
方法一:R=A1/A3 (直接用药物峰面积之比计算)
方法二:R=R1/R2 (用药物与内标的比值计算)
请教各位做药代动力学的朋友,我所做的药物提取回收率方法是否正确?
计算提取回收率是应该用方法一,还是方法二?
希望大家能给予帮助,非常感谢!
方法可以。方法一要合理一些。
方法一和方法二是一样的计算结果。
你这个表述得都有点乱,看你的意思,我觉得应该用方法一吧
从严谨的药动学实验来看两方法均欠准确,前者稍好些。看你的方法中血浆用量应当是非质谱方法进行分析,那么有如下需注意的事项,1、对于加入血浆的标准液体积不应超过10%,以少于5%为宜。因为标准品先溶于溶液(水,有的甚至是有机溶剂),再与血浆混合,而实验的血浆样品处理方法与其不一样,即药物与血浆均匀存在后加入溶液(仅是不含待检成分的水等),因此其过程不一样,并不能反映真实过程的回收率。所以对于您方法中0.5ml血浆,所加标准溶液最好不超过0.025ml。实际上有的方法中现将标准溶液加入EP管,氮气吹干后,加入0.5ml血浆最可取。2、若用“方法二:R=R1/R2 (用药物与内标的比值计算)”,则操作1中内标加的顺序不对。因为内标本身也有回收率,其的存在将影响待测物的回收率。其应当加在残渣样品用流动相复融后,起到校正仪器的作用。若这样的话“方法2”共准确。
以上建议仅针对非液质的检测方法,如用LC/MS-MS检测,则更复杂,因要考虑基质效应(绝对、相对)的影响。
我在做药代中药物的提取回收率,看了一些文献,但提取回收率的做法不一,所以想请教大家给予正确的做法。
我是这样做提取回收率的,不知是否正确,做法如下:1.取一个浓度的标准溶液(比如8ug/ml的标准液)100ul,加入空白血浆0.5ml,再加内标50ul,加少量磷酸后,涡旋混匀。然后加入3ml的乙酸乙酯进行萃取,涡旋3min,离心(4000r/min)10min,取一定量的上清液,在45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A1、A2,R1=A1/A2。 2. 另取8ug/ml的标准液100ul,再加内标50ul,混匀后于45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A3、A4,R2=A3/A4 。
提取回收率的计算如下:
方法一:R=A1/A3 (直接用药物峰面积之比计算)
方法二:R=R1/R2 (用药物与内标的比值计算)
请教各位做药代动力学的朋友,我所做的药物提取回收率方法是否正确?
计算提取回收率是应该用方法一,还是方法二?
希望大家能给予帮助,非常感谢!
方法可以。方法一要合理一些。
方法一和方法二是一样的计算结果。
你这个表述得都有点乱,看你的意思,我觉得应该用方法一吧
从严谨的药动学实验来看两方法均欠准确,前者稍好些。看你的方法中血浆用量应当是非质谱方法进行分析,那么有如下需注意的事项,1、对于加入血浆的标准液体积不应超过10%,以少于5%为宜。因为标准品先溶于溶液(水,有的甚至是有机溶剂),再与血浆混合,而实验的血浆样品处理方法与其不一样,即药物与血浆均匀存在后加入溶液(仅是不含待检成分的水等),因此其过程不一样,并不能反映真实过程的回收率。所以对于您方法中0.5ml血浆,所加标准溶液最好不超过0.025ml。实际上有的方法中现将标准溶液加入EP管,氮气吹干后,加入0.5ml血浆最可取。2、若用“方法二:R=R1/R2 (用药物与内标的比值计算)”,则操作1中内标加的顺序不对。因为内标本身也有回收率,其的存在将影响待测物的回收率。其应当加在残渣样品用流动相复融后,起到校正仪器的作用。若这样的话“方法2”共准确。
以上建议仅针对非液质的检测方法,如用LC/MS-MS检测,则更复杂,因要考虑基质效应(绝对、相对)的影响。