各位大虾:
本人要做肝微粒体孵育试验，但我查了一些文献后还是不甚了解这方面的知识。请问有没有专门的书籍可以参考，或者是有没有专门的文献介绍肝微粒体制备？
谢谢！！
上述各组动物禁食24小时后断头处死,取出肝脏,放入试管内置于冰上。加4倍于肝重的0.25mol/L蔗糖溶液制备匀浆,经1000g离心10min,4℃。将上清液收集于另一试管内置于冰上,在上述沉淀物中再加入4倍肝重的0.25mol/L蔗糖溶液搅拌均匀,同样离心速度、时间及条件制得上清液,收集两次上清液于4℃ 12000g离心15min,再取上清液于400000g4℃离心65min。取沉淀物用0.15mol/L kcl溶液制成匀浆,经400000g于4℃离心65min,所得微粒体用新鲜配制的0.1mol/LTris-Hcl缓冲液(pH7.4)稀释,Lorry法测定蛋白浓度。
环境毒理学基础
环境毒理学基础
作者 ： 孟紫强
出版社 ： 蓝色畅想图书有限公司（高等教育出版社）
出版日期 ： 2003-12-1
多谢！但通过文献发现二次离心的转速不甚相同，请问到底转速是多少？
1. 将所有缓冲溶液、试管、剪刀等用具日前冷藏 (4oC)，并于实验当日置于冰上。
2. 烧杯（50 mL）中加约20 mL蔗糖溶液，放于冰上。大鼠称重后断头处死，立即开腹，取出肝脏，放于预冷的蔗糖溶液中，清洗3遍。滤纸吸干，称重。
3. 将烧杯置于冰浴中，用剪刀将肝脏剪成小块，用冰冷的蔗糖溶液洗2-3次，至洗出液呈无色或淡黄色。再用剪刀剪成浆状。
4. 加4倍肝重的蔗糖溶液，在冰浴中用匀浆机匀浆30秒，重复2-3次，直至无明显可见的碎块。
5. 转入离心管中，冷冻离心20 min（4 oC，20000 g）。
6. 取上清液冷冻离心60 min（4 oC，100000 g）。
7. 弃去上清液，沉淀用4倍肝重的焦磷酸钾缓冲液涡旋混悬均匀。
8. 再次冷冻离心60 min（4oC，100000 g）。
9. 沉淀用4倍肝重的Tris缓冲液涡旋混悬均匀。
10.分装于eppendorf管中（每只1.0 mL）,于-80 oC保存备用。
请问要达到100000×g这么大离心力，你们用的是什么品牌、型号的离心机
一般的离心机很难达到 100000×g，据说这种离心机很贵，要70万一台，美国beikman（记不太清楚）的。我用过一次。
必须要到10万g，不然得不到微粒体。
现在回复补充一些，希望有所帮助
肝微粒体温孵法步骤：动物预处理（酶诱导），组织匀浆制备，蛋白质（酶）含量的测定，药物代谢酶辅助因子溶液的配置，各种重要药物代谢酶的含量测定或活性测定最后温孵。
动物预处理（酶诱导）：以药物或其他外源性物质对实验动物进行预处理，可诱导肝脏中药物代谢酶的含量及活性的增加。苯巴比妥诱导法：将苯巴比妥溶于生理盐水中，每天对实验动物进行腹腔注射，剂量为80mg/kg每天三次，连续给药三天，第四天按组织匀浆的制备方法分离亚细胞组分制品。对照组动物必须腹腔注射相同体积的生理盐水。另一种方法就是苯巴比妥钠溶于实验动物饮用水中，浓度为1％（w/v），让动物服用5天，实验前一天晚上再换成纯饮用水，次日，按组织匀浆的制备方法分离亚细胞组分制品。
β－萘黄酮诱导法：将β－萘黄酮溶于玉米油中，每天对动物进行腹腔注射，每天一次，剂量为80mg/kg，连续给药三天，第四天按组织匀浆的制备方法分离亚细胞组分制品。对照动物必须腹腔注射相同体积的纯玉米油。
组织匀浆的制备方法，楼上说的很详细了
非常感谢各位站友，我现在已经能够很顺利的制备肝微粒体了，用的是钙离子沉淀法，这个方法的优点是不用超速离心机！谢谢！！！
那你说说怎么用钙离子沉淀法获得肝微粒体的阿
美国backman超速离心机，可达13万转，完全满足需求。
我这里总结了肝微粒体制备及蛋白活性检测方法，仅供参考
肝微粒体制备及检测.doc(96.0k)
各位战友
都不对肝脏进行灌流的吗？
血细胞对活性影响蛮大的
吼吼i……^_^
那你是怎么制备的啊？能否分享下经验，我也是苦于没有超速离心机啊。。。
对啊 能否分享一下经验啊 我最近也要做微粒体的制备，要钙沉淀法。。。希望指导一下啊
楼上的回答太有用了
本人要做肝微粒体孵育试验，但我查了一些文献后还是不甚了解这方面的知识。请问有没有专门的书籍可以参考，或者是有没有专门的文献介绍肝微粒体制备？
谢谢！！
上述各组动物禁食24小时后断头处死,取出肝脏,放入试管内置于冰上。加4倍于肝重的0.25mol/L蔗糖溶液制备匀浆,经1000g离心10min,4℃。将上清液收集于另一试管内置于冰上,在上述沉淀物中再加入4倍肝重的0.25mol/L蔗糖溶液搅拌均匀,同样离心速度、时间及条件制得上清液,收集两次上清液于4℃ 12000g离心15min,再取上清液于400000g4℃离心65min。取沉淀物用0.15mol/L kcl溶液制成匀浆,经400000g于4℃离心65min,所得微粒体用新鲜配制的0.1mol/LTris-Hcl缓冲液(pH7.4)稀释,Lorry法测定蛋白浓度。
环境毒理学基础
环境毒理学基础
作者 ： 孟紫强
出版社 ： 蓝色畅想图书有限公司（高等教育出版社）
出版日期 ： 2003-12-1
多谢！但通过文献发现二次离心的转速不甚相同，请问到底转速是多少？
1. 将所有缓冲溶液、试管、剪刀等用具日前冷藏 (4oC)，并于实验当日置于冰上。
2. 烧杯（50 mL）中加约20 mL蔗糖溶液，放于冰上。大鼠称重后断头处死，立即开腹，取出肝脏，放于预冷的蔗糖溶液中，清洗3遍。滤纸吸干，称重。
3. 将烧杯置于冰浴中，用剪刀将肝脏剪成小块，用冰冷的蔗糖溶液洗2-3次，至洗出液呈无色或淡黄色。再用剪刀剪成浆状。
4. 加4倍肝重的蔗糖溶液，在冰浴中用匀浆机匀浆30秒，重复2-3次，直至无明显可见的碎块。
5. 转入离心管中，冷冻离心20 min（4 oC，20000 g）。
6. 取上清液冷冻离心60 min（4 oC，100000 g）。
7. 弃去上清液，沉淀用4倍肝重的焦磷酸钾缓冲液涡旋混悬均匀。
8. 再次冷冻离心60 min（4oC，100000 g）。
9. 沉淀用4倍肝重的Tris缓冲液涡旋混悬均匀。
10.分装于eppendorf管中（每只1.0 mL）,于-80 oC保存备用。
请问要达到100000×g这么大离心力，你们用的是什么品牌、型号的离心机
一般的离心机很难达到 100000×g，据说这种离心机很贵，要70万一台，美国beikman（记不太清楚）的。我用过一次。
必须要到10万g，不然得不到微粒体。
现在回复补充一些，希望有所帮助
肝微粒体温孵法步骤：动物预处理（酶诱导），组织匀浆制备，蛋白质（酶）含量的测定，药物代谢酶辅助因子溶液的配置，各种重要药物代谢酶的含量测定或活性测定最后温孵。
动物预处理（酶诱导）：以药物或其他外源性物质对实验动物进行预处理，可诱导肝脏中药物代谢酶的含量及活性的增加。苯巴比妥诱导法：将苯巴比妥溶于生理盐水中，每天对实验动物进行腹腔注射，剂量为80mg/kg每天三次，连续给药三天，第四天按组织匀浆的制备方法分离亚细胞组分制品。对照组动物必须腹腔注射相同体积的生理盐水。另一种方法就是苯巴比妥钠溶于实验动物饮用水中，浓度为1％（w/v），让动物服用5天，实验前一天晚上再换成纯饮用水，次日，按组织匀浆的制备方法分离亚细胞组分制品。
β－萘黄酮诱导法：将β－萘黄酮溶于玉米油中，每天对动物进行腹腔注射，每天一次，剂量为80mg/kg，连续给药三天，第四天按组织匀浆的制备方法分离亚细胞组分制品。对照动物必须腹腔注射相同体积的纯玉米油。
组织匀浆的制备方法，楼上说的很详细了
非常感谢各位站友，我现在已经能够很顺利的制备肝微粒体了，用的是钙离子沉淀法，这个方法的优点是不用超速离心机！谢谢！！！
那你说说怎么用钙离子沉淀法获得肝微粒体的阿
美国backman超速离心机，可达13万转，完全满足需求。
我这里总结了肝微粒体制备及蛋白活性检测方法，仅供参考
肝微粒体制备及检测.doc(96.0k)各位战友
都不对肝脏进行灌流的吗？
血细胞对活性影响蛮大的
吼吼i……^_^
那你是怎么制备的啊？能否分享下经验，我也是苦于没有超速离心机啊。。。
对啊 能否分享一下经验啊 我最近也要做微粒体的制备，要钙沉淀法。。。希望指导一下啊
楼上的回答太有用了