做的一个指纹图谱，用的是新柱子，才做十来天吧，原来峰形很好的，可是现在同样的流动相，同样的样品处理方法，同样的色谱条件，却出现大部分峰都前延，只有少数比较的的峰峰形比较好，还有一点峰分叉的现象，本来以为是要更换预柱了，可是换了预柱还是这种情况。
求高人指导，这是怎么回事呢？




可以考虑下溶剂匹配的原因。比如尽量用流动相来溶解样品。柱子是否有问题，可以测下柱效来判断。




可能是柱头出问题了，柱 头筛板堵塞？




你以前做的时候是这样么？要是不是这样，就肯定是流动相的问题了。
做之前仔细核对下有机相和离子对试剂的名字，尤其是磷酸盐，很容易混淆，还有甲醇/乙腈。




做中药类液相的
大都由于样品溶解的溶剂与流动相极性相差较大，容易出现所谓的“溶剂效应”





应该不是柱子问题，我又进了之前剩余的样品，峰形很好，就是后来处理的样品峰前延，我也不知道是样品的什么地方出问题了.





我的流动相是甲醇和0.1%磷酸走的梯度，溶解样品的流动相比例如何确定？





以前做的峰形都很好的，应该不是柱子和流动相的问题，我又进了之前剩余的样品，峰形很好，就是后来处理的样品峰前延，我想应该是后来处理的样品什么地方出问题了，回想了一下还是没找到原因所在




根据以前做项目的经验，由于流动相混合等问题，梯度本身容易出峰，建议楼主上传HPLC图谱，检查流通池是否被污染，或者将色谱柱倒过来用试一试。




导致色谱峰不正常的原因很多：
（1）色谱柱不好：堵塞筛板或有凹陷；
（2）“污物”在柱进口处积聚；
（3）样品超载；
（4）样品的溶剂不对；
（5）柱外效应；
（6）化学或二次保留（硅羟基）效应；
（7）缓冲不足或不合适；
（8）重金属污染。