想向大侠请教一下关于内标校正曲线法的一点问题。

我现在的实验是将四种标准品混合在一起，以倍比稀释做一个浓度梯度，以求标准曲线，浓度分别为，320ng/ml，160ng/ml，80ng/ml，40ng/ml，这些混合的标准品的体积都是500ul。

然后我加入内标物时，按照我买的内标物的浓度，加入到刚才的混合的标准品里，每个里面加1.63ul，后来检测发现，内标的峰面积相差很大。检测的老师和我说，我加的这个这个1.63ul太少了，如果有一点误差，再经过仪器一放大，峰面积的差异就很大。所以我想请教一下大侠们，在我这种条件下，一般内标物加入混合标准品中的体积比最好在多少之内呢？比如我这个混合标准品的体积是500ul，那么内标物需要加多少ul，它们的体积比是多少，才能保证误差在可控制范围之内呢？

非常感谢！！！




内标每个样品浓度点都是加固定的体积。加的体积一般要保证其峰与标线中点的响应类似。移液器加纯有机溶剂误差比较大，多润几下。




你可以先把内标浓度先稀释小些再多加点。
内标的浓度或加入体积量，应使其仪器响应值与你线性中间浓度点的响应相当。