各位高手大家好,我检测纳豆激酶活性是用纤维蛋白平办法:
10 ml纤维蛋白原溶液(1.2 mg/ml 纤维蛋白原,50 mM 巴比妥钠,90 mM NaCl,1.7 mM CaCl2,0.7 mM MgCl2,pH 7.75),10 ml 琼脂糖溶液(0.8%),分别在55°C水浴中温浴,向琼脂糖溶液中加入1 BP凝血酶溶液(溶在10μl巴比妥钠)。纤维蛋白原溶液和琼脂糖溶液在100 mm平皿中混合于室温放置1 h形成纤维蛋白块,打孔,点样10 μl酶液,37温浴18 h,以尿激酶(100、 80、 60、 40、 20 U/ml)为标准制作标准曲线,计算纳豆激酶的酶活。
问题出现在尿激酶标准曲线的制作上,上次做直接点尿激酶都没有溶解圈。后来发现尿激酶通过作用于纤维蛋白溶酶原从而发挥作用,为什么我看到的文献上,在做纤维蛋白平板的时候都没提到纤维蛋白溶酶原溶液那??不知道大家做的时候纤维蛋白溶酶原是什么时候加的?请高手赐教
你好 我现在也准备做这个实验了 请问你这个实验做成功了吗
我最近也要做纳豆激酶活性测定,我想请问下楼主”1BP凝血酶“是什么单位?还有纤维蛋白平板打孔一般都是直径2mm的孔吗?有专门的打孔工具吗?谢谢!
10 ml纤维蛋白原溶液(1.2 mg/ml 纤维蛋白原,50 mM 巴比妥钠,90 mM NaCl,1.7 mM CaCl2,0.7 mM MgCl2,pH 7.75),10 ml 琼脂糖溶液(0.8%),分别在55°C水浴中温浴,向琼脂糖溶液中加入1 BP凝血酶溶液(溶在10μl巴比妥钠)。纤维蛋白原溶液和琼脂糖溶液在100 mm平皿中混合于室温放置1 h形成纤维蛋白块,打孔,点样10 μl酶液,37温浴18 h,以尿激酶(100、 80、 60、 40、 20 U/ml)为标准制作标准曲线,计算纳豆激酶的酶活。
问题出现在尿激酶标准曲线的制作上,上次做直接点尿激酶都没有溶解圈。后来发现尿激酶通过作用于纤维蛋白溶酶原从而发挥作用,为什么我看到的文献上,在做纤维蛋白平板的时候都没提到纤维蛋白溶酶原溶液那??不知道大家做的时候纤维蛋白溶酶原是什么时候加的?请高手赐教
你好 我现在也准备做这个实验了 请问你这个实验做成功了吗
我最近也要做纳豆激酶活性测定,我想请问下楼主”1BP凝血酶“是什么单位?还有纤维蛋白平板打孔一般都是直径2mm的孔吗?有专门的打孔工具吗?谢谢!