经常在实验中发现：使用简单的流动相（仅仅是有机溶剂+水，用酸碱调节pH)使用不同的溶剂溶解样品，样品的峰形、峰面积会有较大的变化，甚至连保留时间都会变化。不知道为何发生这种情况？以前曾经在Waters的一份技术手册上看到过详细的解释，当时没有留意。哪位高手给个指点或传一份电子的资料？多谢！
没人知道？自己顶！
你想要WATERS的什么资料
我有一本WATERS的培训资料，就是蓝皮的那本，不知道你见过没，电子版的也有
找了好久才找到,希望对你有所帮助:
1.改变pH 值不仅能够改变色谱峰形，而且可以改变组分的出峰次序。
pH 的调节需要使用缓冲液。
根据待测样品的化学结构选择合适pH 范围
pH 变化会对不同结构化合物的色谱行为产生不同的影响。中性化合物在反相色谱系统的保留与pH 无关；酸性化合物在pH 趋于酸性（pH 变小，尤其低于化合物的pka 值）时会因状态趋于中性而增加保留；而碱性化合物在pH 趋于碱性（pH 变大，尤其高于化合物的pka 值）时会因状态趋于中性而增加保留。反之，高pH 时酸性化合物保留降低；低pH 时碱性物质保留会降低（可参见图1）。若想获得稳定的保留，对于酸性待测物而言，流动相的pH 值最好低于待测物之pka两个单位；对于碱性待测物来说，流动相的pH 值最好高于待测物之pka 两个单位。
2.用流动相溶解样品能够得到很好的峰形。
当溶解样品的溶剂不同于流动相时，样品溶剂与流动相发生混合，样品溶剂被冲稀。
如果进样溶剂之强度高于流动相，样品在瞬间会表现为在较强溶剂中，并以较快速度通过色谱柱。表现在色谱图上就是如图1a中所示的那样∶色谱峰的保留时间缩短。`当进样溶剂与流动相混合时，一部分分子
会先与流动相混合，致使这些分子通过色谱柱的速度发生变化，使峰形扭曲，发生变形。洗脱较早的色谱峰峰变形要比洗脱晚的色谱峰严重(如图1a所示)。解决进样溶剂问题的关键是使进样体积足够小，这样稀释过程会非常快；或使用比流动相弱的溶剂溶解样品。较弱的溶剂会使样品在色谱柱上发生浓缩，在某些情况下，色谱峰会比使用较强溶剂时窄一些。
因此，在通常情况下，如果溶解样品的溶剂比流动相强，进样体积应不高于25mL。进样体积大小与进样溶剂与流动相之间的差别大小有关。这一差别很容易凭经验得到∶逐渐加大进样体积，直至发生峰变形现象。采用比发生峰变形时小一些的进样体积即可。
问题中发生的峰变形就是因为溶解样品的溶剂甲醇强度远远高于流动相，因而得到了变形的、展宽的峰。如果使用水来溶解样品，溶解样品的溶剂弱于流动相，峰形会得以改善。在离子对色谱中，我们建议使用流动相来溶解样品，以最大程度地降低基线假峰(baselineartifacts)的出现。
l
传上两个附件:
buffers_ph.pdf(7.02k)
附件:
PEAK_DIS.pdf(23.3k)
楼上的解释的很好，LZ的问题问得不够详细，不知道你说的简单的流动相是不是仅指有机相和水？
非常感谢chenjinfu123的答复，强烈建议版主加分。
不错,学习了!
不错啊，学习中，谢谢各位高手的赐教
谢谢chenjinfu123的回答，受教了。
谢谢啊。。。
haotie ! 顶！
不过有个问题， 为什么不是全部物质都有溶剂效应呢！？
有的化合物有，有的就没有！如何解释！？多谢！
个体差异的情况总是有的，基本符合28定律
做HPLC，样品的溶液当然足以影响结果。有一个原则，就是看看流动相的极性是否与您的样品溶液相仿。一般我们做等梯度时都用流动相来配样品就是这个道理。做梯度就要用比起始流动相的极性要大（注射后能够保留在柱子中）。如果样品的溶液极性小，那么样品溶液中有机溶剂可以变为您流动相的一部分。所以注射体积极为重要。如果打10毫升没有问题，打20毫升，或15毫升可能就出问题了。最好的例子就是样品溶液中有三氯甲烷。有时候我们需要加少许来溶解样品，如果加进去了，问题就大了。大家没事的时候可以玩玩。
没人知道？自己顶！
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我有一本WATERS的培训资料，就是蓝皮的那本，不知道你见过没，电子版的也有
找了好久才找到,希望对你有所帮助:
1.改变pH 值不仅能够改变色谱峰形，而且可以改变组分的出峰次序。
pH 的调节需要使用缓冲液。
根据待测样品的化学结构选择合适pH 范围
pH 变化会对不同结构化合物的色谱行为产生不同的影响。中性化合物在反相色谱系统的保留与pH 无关；酸性化合物在pH 趋于酸性（pH 变小，尤其低于化合物的pka 值）时会因状态趋于中性而增加保留；而碱性化合物在pH 趋于碱性（pH 变大，尤其高于化合物的pka 值）时会因状态趋于中性而增加保留。反之，高pH 时酸性化合物保留降低；低pH 时碱性物质保留会降低（可参见图1）。若想获得稳定的保留，对于酸性待测物而言，流动相的pH 值最好低于待测物之pka两个单位；对于碱性待测物来说，流动相的pH 值最好高于待测物之pka 两个单位。
2.用流动相溶解样品能够得到很好的峰形。
当溶解样品的溶剂不同于流动相时，样品溶剂与流动相发生混合，样品溶剂被冲稀。
如果进样溶剂之强度高于流动相，样品在瞬间会表现为在较强溶剂中，并以较快速度通过色谱柱。表现在色谱图上就是如图1a中所示的那样∶色谱峰的保留时间缩短。`当进样溶剂与流动相混合时，一部分分子
会先与流动相混合，致使这些分子通过色谱柱的速度发生变化，使峰形扭曲，发生变形。洗脱较早的色谱峰峰变形要比洗脱晚的色谱峰严重(如图1a所示)。解决进样溶剂问题的关键是使进样体积足够小，这样稀释过程会非常快；或使用比流动相弱的溶剂溶解样品。较弱的溶剂会使样品在色谱柱上发生浓缩，在某些情况下，色谱峰会比使用较强溶剂时窄一些。
因此，在通常情况下，如果溶解样品的溶剂比流动相强，进样体积应不高于25mL。进样体积大小与进样溶剂与流动相之间的差别大小有关。这一差别很容易凭经验得到∶逐渐加大进样体积，直至发生峰变形现象。采用比发生峰变形时小一些的进样体积即可。
问题中发生的峰变形就是因为溶解样品的溶剂甲醇强度远远高于流动相，因而得到了变形的、展宽的峰。如果使用水来溶解样品，溶解样品的溶剂弱于流动相，峰形会得以改善。在离子对色谱中，我们建议使用流动相来溶解样品，以最大程度地降低基线假峰(baselineartifacts)的出现。
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传上两个附件:
buffers_ph.pdf(7.02k)附件:
PEAK_DIS.pdf(23.3k)楼上的解释的很好，LZ的问题问得不够详细，不知道你说的简单的流动相是不是仅指有机相和水？
非常感谢chenjinfu123的答复，强烈建议版主加分。
不错,学习了!
不错啊，学习中，谢谢各位高手的赐教
谢谢chenjinfu123的回答，受教了。
谢谢啊。。。
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不过有个问题， 为什么不是全部物质都有溶剂效应呢！？
有的化合物有，有的就没有！如何解释！？多谢！
个体差异的情况总是有的，基本符合28定律
做HPLC，样品的溶液当然足以影响结果。有一个原则，就是看看流动相的极性是否与您的样品溶液相仿。一般我们做等梯度时都用流动相来配样品就是这个道理。做梯度就要用比起始流动相的极性要大（注射后能够保留在柱子中）。如果样品的溶液极性小，那么样品溶液中有机溶剂可以变为您流动相的一部分。所以注射体积极为重要。如果打10毫升没有问题，打20毫升，或15毫升可能就出问题了。最好的例子就是样品溶液中有三氯甲烷。有时候我们需要加少许来溶解样品，如果加进去了，问题就大了。大家没事的时候可以玩玩。