想请教下 群里高手 液相摸条件的经验 ，最近发出一对未知天然产物 不过液相中两峰始终分离效果不好 ，清群中高手 给些HPLC摸条件的经验了
1、如果能有相关的文献或资料参考，估计会相对比较简单。
2、条件摸索
a、样品性质
主要了解化合物的结构、分子量、pKa、UV、样品浓度范围、溶解度等。
b、色谱柱选择
样品能溶于水-有机混合液的大多数样品（特别是中性或非离子化合物），可以选择反相HPLC，流动相选择水-有机溶剂，色谱柱可以选择C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比较多。
样品为离子或可电离的化合物（特别是碱性或阳离子样品），可以选择离子对HPLC，流动相选择水-有机溶剂，控制pH的缓冲液和离子对试剂，色谱柱可选择C18、C8、氰基。一般C18用得比较多。
若反相或离子对HPLC无效时，或样品不溶于水-有机混合液。可以选择正相HPLC体系。流动相选择有机溶剂混合液，色谱柱选择氰基、氨基、硅胶、二醇基。
c、初始分离条件（相对较好的首要选择、等度）
色谱柱：150X4.6mm、5um、固定相为C18或C8
流动相：缓冲液-乙腈，缓冲液可选择纯水或缓冲盐（浓度10~30mM）（若中性样品，无需使用缓冲盐）并用酸碱调控pH（如果pH小于2.5，建议选择pH稳定的色谱柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以选择80~100%。
离子对等添加剂，开始时请不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱温35~40℃。
样品：（最好以流动相溶解样品）进样体积小于25uL，进样量小于100ug。
d、液相方法基本目标
分离度：R大于1.5
分离时间：5~10min较理想
定量：RSD小于2%
压力：基本要求小于200bar（20M）
针对基本目标，按实际情况进行调整，譬如流动相实际组分比例，缓冲盐浓度及pH，柱温，梯度等。
开个头吧，首先用一根常用的色谱柱，15，20的都可以，用纯乙腈做流动相，确定所有组分洗脱，对组分情况有个了解，然后进行梯度。当然如果是化药直接走乙腈水梯度就可以，确定大概的梯度范围和成分的洗脱比例，然后就可以微调梯度，加入调节试剂（酸，盐，离子对……），最后可以筛选不同品牌色谱柱
大家用液相分离化合物的一般步骤是什么啊？？？本人很迷茫啊，条件总是选的不好，浪费样品
我也有相同的迷惑，最近试验老是摸不准条件，拿资料里面的条件试又不能重现！2楼的方法我可以借鉴一下！
一般来说就三种方式：调整出峰时间，加入调解试剂，换柱子。
其实三种方式都不能很有效的解决问题，只能在有限程度上改善，一般都是切峰以后二次分离，一次性就达到很好的分离效果，基本上不太现实。
还可以加少许酸调整峰型，比如说磷酸啊
如果不确定化合物的极性，就用乙腈和水作为流动相，0%-100%梯度洗脱一定时间，根据柱子长短不同设定时间，然后看化合物的出峰时间估算多少梯度出来的，然后极性差不多知道了以后就简单了
1、如果能有相关的文献或资料参考，估计会相对比较简单。
2、条件摸索
a、样品性质
主要了解化合物的结构、分子量、pKa、UV、样品浓度范围、溶解度等。
b、色谱柱选择
样品能溶于水-有机混合液的大多数样品（特别是中性或非离子化合物），可以选择反相HPLC，流动相选择水-有机溶剂，色谱柱可以选择C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比较多。
样品为离子或可电离的化合物（特别是碱性或阳离子样品），可以选择离子对HPLC，流动相选择水-有机溶剂，控制pH的缓冲液和离子对试剂，色谱柱可选择C18、C8、氰基。一般C18用得比较多。
若反相或离子对HPLC无效时，或样品不溶于水-有机混合液。可以选择正相HPLC体系。流动相选择有机溶剂混合液，色谱柱选择氰基、氨基、硅胶、二醇基。
c、初始分离条件（相对较好的首要选择、等度）
色谱柱：150X4.6mm、5um、固定相为C18或C8
流动相：缓冲液-乙腈，缓冲液可选择纯水或缓冲盐（浓度10~30mM）（若中性样品，无需使用缓冲盐）并用酸碱调控pH（如果pH小于2.5，建议选择pH稳定的色谱柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以选择80~100%。
离子对等添加剂，开始时请不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱温35~40℃。
样品：（最好以流动相溶解样品）进样体积小于25uL，进样量小于100ug。
d、液相方法基本目标
分离度：R大于1.5
分离时间：5~10min较理想
定量：RSD小于2%
压力：基本要求小于200bar（20M）
针对基本目标，按实际情况进行调整，譬如流动相实际组分比例，缓冲盐浓度及pH，柱温，梯度等。
开个头吧，首先用一根常用的色谱柱，15，20的都可以，用纯乙腈做流动相，确定所有组分洗脱，对组分情况有个了解，然后进行梯度。当然如果是化药直接走乙腈水梯度就可以，确定大概的梯度范围和成分的洗脱比例，然后就可以微调梯度，加入调节试剂（酸，盐，离子对……），最后可以筛选不同品牌色谱柱
大家用液相分离化合物的一般步骤是什么啊？？？本人很迷茫啊，条件总是选的不好，浪费样品
我也有相同的迷惑，最近试验老是摸不准条件，拿资料里面的条件试又不能重现！2楼的方法我可以借鉴一下！
一般来说就三种方式：调整出峰时间，加入调解试剂，换柱子。
其实三种方式都不能很有效的解决问题，只能在有限程度上改善，一般都是切峰以后二次分离，一次性就达到很好的分离效果，基本上不太现实。
还可以加少许酸调整峰型，比如说磷酸啊
如果不确定化合物的极性，就用乙腈和水作为流动相，0%-100%梯度洗脱一定时间，根据柱子长短不同设定时间，然后看化合物的出峰时间估算多少梯度出来的，然后极性差不多知道了以后就简单了