搜索了坛里面的一些帖子，还有一些疑问，请各位战友帮忙。

本人计划用中药体外处理小鼠脾细胞，ConA诱导细胞转化后，MTT测定。

1、关于中药的溶解与灭菌：水溶性的用细胞培液溶解，非水溶性用DMSO溶解。灭菌采用过滤方式，2层滤纸过滤，然后0.45nm滤膜过滤，然后一次性0.22nm针式滤器过滤。可行吗？

2、中药作用于细胞的时间：看文献，有的是48h，有的是66h，还有的是中药作用24h后，换正常培液继续培养一段时间，再做诱导。请问哪种方式比较合适？

3、关于中药的浓度问题：这个该如何去决定，如果需要摸索浓度，该以多少为起始浓度？（大概的数量级既可以）

4、关于细胞浓度：该以多少细胞浓度为宜？药理书上是10的6次方每孔。但是看坛子里的帖子有提到用10000每孔。故请教一下？

5、关于提取下来的细胞保存：一只小鼠提取出来的脾细胞悬液应该不少，这个实验肯定不能一次性做完，需要多几轮，是否需要每次提取新鲜的脾细胞，还是能够将细胞保存或者培养着，已作下一轮只用？

暂时这些问题，请教大家了。谢谢！




如果不是单体,建议就不要做了,因为:
[1]很难做出活性来.
[2]即使有活性,也很难做出浓度倚赖关系.
[3]很难找到最适或亚适细胞浓度,药物浓度.
[4]MTT法测定淋巴细胞增殖没有同位素参入法灵敏,如活性不强,MTT法做不出来.
[5]实验误差大,结果不好分析.
-----,还有很多很多.




感谢wang001的回答

如果只是做一个初步的筛选呢？比较几个中药处方在这方面的作用，是不是这个方法还是可以做？

如果必须上，有什么需要特别注意或者改进的？




你会比不出谁好谁不好,最好不要做!




不要盲目的否定复方的研究





1.非水溶性的用DMSO溶的话，普通的滤膜会被DMSO溶解掉的。而且如果DMSO买的是SIGMA的，本身可以认为是无菌。

2.关于细胞浓度，培养时间，这个需要做预实验的。

3.脾细胞的话每次最好要用新鲜的。