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用高效液相色谱法测定:谷氨酰胺的衍生方法

时间: 2012-05-08 02:21:01 作者: 来源: 字号:
根据文献,谷氨酰胺用邻苯二甲醛(OPA)和β-巯基乙醇(β-MCE)去衍生,HLPC用的是紫外检测器。可先用紫外扫波长,在340nm紫外波长下检测不到波长,求高手们多多帮忙?衍生条件怎么配制?衍生方法是什么?

我有两个方法:

方法一:配制:称取取13.5mg的邻苯二甲醛(OPA)溶于1ml 甲醇中,加40mmol/l硼酸缓冲液(pH9.5)9.0ml,混匀后,加人0.2ml 琉基乙醇,再次混匀后备用.
衍生方法:准确吸取样本或标准品20μL,加100 μLOPA衍生剂,振荡混匀,在室温下反应90s,取20进样进行色谱分析。

方法二:配制:称取邻苯二甲醛25. 0 mg 用1 ml 甲醇溶解,以0. 4 mol/ L 硼酸缓冲( pH9. 5, NaOH 溶液调制)定容至10 ml ,混匀,置于暗处,隔天补充10μL二琉基乙醇,每周需重新配置
衍生方法:取50μL处理样品与50μLOPA 衍生液混匀, 室温反应70 s,加50 μL0. 1 mol/ L 磷酸缓冲( pH4. 0)终止反应。取10μL反应液注入高效液相色谱仪进行分析

以上我按文献上做了,还是衍生不出来,请大家分析分析?
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