最近做血小板聚集实验,在制备“富血小板(PRP)”中遇到一个离心问题:
欲得到更多的PRP上清,通过增加全血量并不奏效。离心条件为800r/min,离心时间10min,用1ml全血,可得250ul PRP,但全血量为2ml时,同样离心条件下,仍只可得到250ul PRP上清,并未见增加。这是何原因呢?以下是手机拍下的照片,不是太清楚啦。望有经验的战友指点一下:
图1:1ml 全血 离心 800r 10min

图2:2ml 全血 离心 800r 10min

图3: 2ml全血与1ml全血,同样离心条件下离心后,上清量并无优势

再来看一看,将同体积、同一只大鼠的抗凝血置于不同规格(不同管径)的离心管,均在800r/min离心10min后,所得富血小板血浆(PRP)的区别:从所得上清体积、血小板含量两个指标对比,都不相同。
鼠号 离心管规格 所得上清体积 血小板含量(/uL)
1 1ml 尖底 150uL 219×103
1 5ml 尖底 250uL 168×103
1 10ml 圆底 350uL 96×103
2 1ml 尖底 150uL 216×103
2 5ml 尖底 250uL 159×103
2 10ml 圆底 350uL 68×103
3 1ml 尖底 150uL 196×103
3 5ml 尖底 250uL 152×103
3 10ml 圆底 350uL 68×103
按照《药理学实验方法》一书所述,在血小板聚集实验PRP的制备要求用200g离心力10min。在我们的实际操作中,除考虑离心力对血小板的保留作用外,离心管的管径也是应该考虑的因素。在取得PRP上清后,应用血小板计数法评价PRP含量是否符合聚集实验的要求。以下分别是三种规格离心管800r/min离心10min后拍摄的上清照片。
图一:1ml 尖底离心管

图二:5ml 尖底离心管

图三:10ml 圆底离心管

2ml的分成两个1ml管来离心,一般8-10ml的全血我能拿到4ml PRP
谢谢。
我们也遇到了同样的情况。发现,同样的离心力和时间,但全血体积不一样,分别为5ml和10ml,最终获得的血清量却大致相等。所以认为随着全血体积的增大,应当适当延长离心的时间。
欲得到更多的PRP上清,通过增加全血量并不奏效。离心条件为800r/min,离心时间10min,用1ml全血,可得250ul PRP,但全血量为2ml时,同样离心条件下,仍只可得到250ul PRP上清,并未见增加。这是何原因呢?以下是手机拍下的照片,不是太清楚啦。望有经验的战友指点一下:
图1:1ml 全血 离心 800r 10min

图2:2ml 全血 离心 800r 10min

图3: 2ml全血与1ml全血,同样离心条件下离心后,上清量并无优势

再来看一看,将同体积、同一只大鼠的抗凝血置于不同规格(不同管径)的离心管,均在800r/min离心10min后,所得富血小板血浆(PRP)的区别:从所得上清体积、血小板含量两个指标对比,都不相同。
鼠号 离心管规格 所得上清体积 血小板含量(/uL)
1 1ml 尖底 150uL 219×103
1 5ml 尖底 250uL 168×103
1 10ml 圆底 350uL 96×103
2 1ml 尖底 150uL 216×103
2 5ml 尖底 250uL 159×103
2 10ml 圆底 350uL 68×103
3 1ml 尖底 150uL 196×103
3 5ml 尖底 250uL 152×103
3 10ml 圆底 350uL 68×103
按照《药理学实验方法》一书所述,在血小板聚集实验PRP的制备要求用200g离心力10min。在我们的实际操作中,除考虑离心力对血小板的保留作用外,离心管的管径也是应该考虑的因素。在取得PRP上清后,应用血小板计数法评价PRP含量是否符合聚集实验的要求。以下分别是三种规格离心管800r/min离心10min后拍摄的上清照片。
图一:1ml 尖底离心管

图二:5ml 尖底离心管

图三:10ml 圆底离心管

2ml的分成两个1ml管来离心,一般8-10ml的全血我能拿到4ml PRP
谢谢。
我们也遇到了同样的情况。发现,同样的离心力和时间,但全血体积不一样,分别为5ml和10ml,最终获得的血清量却大致相等。所以认为随着全血体积的增大,应当适当延长离心的时间。