最近在做大鼠的分布,在做药物组织分布的时候经常要考虑的是要避免脏器中的血液的影响,那么在就要清洗脏器了,可是我清洗的脏器不知道要到什么程度才算是可以的,我把脏器切碎了,再清洗,再用滤纸吸干,按理来说应该是把脏器中的血液已经清洗干净了,但是结果匀浆出来的仍然是血红色的,听说如果匀浆的好的话匀浆的颜色是白色的,至少不会是血红色的。我始终都是无法办到,不知道各位药动学的人士是如何处理匀浆的,给我讲讲,谢谢了。
首先,大鼠处死放血要干净,一定要尽量多地放血,可以用股动脉放血、断头等。
第二,才是清洗,一些血流丰富的器官,如心脏、肾脏等,先抛开大致清洗,然后称重,剪碎清洗。
每次匀浆的量不要太多,我们每次也就0.2g左右,不会很大量的。匀浆有些组织是白色的,有些是粉红色的(比如心脏、肾脏,本来组织细胞颜色就很红啊),不会有血红色的。
为了保证取样的均匀性,应该整个脏器都匀浆后,再取少量进行处理分析!
而不是二楼说的“每次匀浆的量不要太多,我们每次也就0.2g左右,不会很大量的。”
首先要谢谢楼上两位的留言,不知道楼上的那位朋友能够讲的再详细点吗?例如:匀浆的时候要不要切碎了在清洗脏器,一般什么脏器能够匀浆得到的是白色的匀浆液?方便的话可以留下联系方式吗?我的QQ:305581306
弱弱的问一句
组织匀浆的时候需要在冰水浴上吗?
若是想要达到细胞破碎
一般需要多大转速,匀浆多长时间?
谢谢
帮你顶一下。也打算匀浆。
避免血液影响:
1 充分放血 (找到颈动脉或股动脉,剪断,放血会比较充分)。
2 对于血流较丰富的器官,比如肝脏,可用生理盐水从肝门静脉灌流冲洗。
组织匀浆:
整个组织(或者一部分组织,比如1克,具体需要考虑组织的大小和所含药物量及方法的检测限),置于适当的容器中(比如试管,10ml),加入适当体积的适当溶剂(体积可采用1:2,即1g组织用2ml溶剂,至于溶剂的种类,可选择水、甲醇、乙腈等,具体需要考虑药物的溶解性),然后以10000g的高速匀浆机进行匀浆(时间大约1min),直至获得均一的匀浆液,然后超声5min(为充分溶出药物,但须考虑药物的稳定性)、3500g离心5min,分取上清液。然后按照与血浆的预处理方法继续处理进样测定即可。
上述操作的主要目的是将组织细胞中的药物完全溶解出来,从而能够测定全部的药物浓度。因此如果采用细胞破碎仪也可以。
但在操作中需要考虑药物的稳定性。毕竟高速匀浆会产热导致药物降解。
匀浆时最好保持低温,因为30度左右代谢酶会产生活性,可能会影响测定结果。
可不可以加液氮,然后研磨啊?
匀浆的目的是什么?应该是测里面的某种成分的含量或活性吧,或者其他目的。冰水浴的目的是什么?防止活性成分分解或灭活。如果你要测的东西稳定性做够好,没必要冰水浴。
用过手动的匀浆器,还未见过自动的,不知转速多少。
在这也顺便请问一下:
做药物在组织分布一定要排干净血液么?
有一种观点是血液流经组织也算是组织的一部分吧?
s032146已经讲得很详细了!
应该是03级药大药代或药分的硕士,向学长或学姐问好!
“然后以10000g的高速匀浆机进行匀浆(时间大约1min),直至获得均一的匀浆液,然后超声5min(为充分溶出药物,但须考虑药物的稳定性)、3500g离心5min,分取上清液。”请教一下,对于很小的组织(卵巢,瘤等)匀浆后液体很少,还用离心取上清测定吗?离心对后期测定能有多大的影响?
组织匀浆的时候需要在冰上操作,加蛋白酶抑制剂.
请问可以用液氮研磨,然后再超声细胞破碎仪破碎吗?
用1000万转速的高速匀浆3-5min,直接4000r离心5min,是不是可以?请教了。
我做过人体的肺组织匀浆,感觉一点都没有红色几乎不可能。
我是把组织剪碎然后匀浆机打匀,然后用超声仪超声。感觉效果很不错,实验结果和预期很接近。
我就是曾经的园内风云人物xx800308,华山抗生素研究所谢欣是也。见效见效,呵呵,隐居三个月以后又高调回归。哈哈哈。可惜以前的密码忘记了,只好另起炉灶。郁闷。
兄弟们,这么好的方法,建议楼主加分啊。超声绝对是个好方法。
首先,大鼠处死放血要干净,一定要尽量多地放血,可以用股动脉放血、断头等。
第二,才是清洗,一些血流丰富的器官,如心脏、肾脏等,先抛开大致清洗,然后称重,剪碎清洗。
每次匀浆的量不要太多,我们每次也就0.2g左右,不会很大量的。匀浆有些组织是白色的,有些是粉红色的(比如心脏、肾脏,本来组织细胞颜色就很红啊),不会有血红色的。
为了保证取样的均匀性,应该整个脏器都匀浆后,再取少量进行处理分析!
而不是二楼说的“每次匀浆的量不要太多,我们每次也就0.2g左右,不会很大量的。”
首先要谢谢楼上两位的留言,不知道楼上的那位朋友能够讲的再详细点吗?例如:匀浆的时候要不要切碎了在清洗脏器,一般什么脏器能够匀浆得到的是白色的匀浆液?方便的话可以留下联系方式吗?我的QQ:305581306
弱弱的问一句
组织匀浆的时候需要在冰水浴上吗?
若是想要达到细胞破碎
一般需要多大转速,匀浆多长时间?
谢谢
帮你顶一下。也打算匀浆。
避免血液影响:
1 充分放血 (找到颈动脉或股动脉,剪断,放血会比较充分)。
2 对于血流较丰富的器官,比如肝脏,可用生理盐水从肝门静脉灌流冲洗。
组织匀浆:
整个组织(或者一部分组织,比如1克,具体需要考虑组织的大小和所含药物量及方法的检测限),置于适当的容器中(比如试管,10ml),加入适当体积的适当溶剂(体积可采用1:2,即1g组织用2ml溶剂,至于溶剂的种类,可选择水、甲醇、乙腈等,具体需要考虑药物的溶解性),然后以10000g的高速匀浆机进行匀浆(时间大约1min),直至获得均一的匀浆液,然后超声5min(为充分溶出药物,但须考虑药物的稳定性)、3500g离心5min,分取上清液。然后按照与血浆的预处理方法继续处理进样测定即可。
上述操作的主要目的是将组织细胞中的药物完全溶解出来,从而能够测定全部的药物浓度。因此如果采用细胞破碎仪也可以。
但在操作中需要考虑药物的稳定性。毕竟高速匀浆会产热导致药物降解。
匀浆时最好保持低温,因为30度左右代谢酶会产生活性,可能会影响测定结果。
可不可以加液氮,然后研磨啊?
匀浆的目的是什么?应该是测里面的某种成分的含量或活性吧,或者其他目的。冰水浴的目的是什么?防止活性成分分解或灭活。如果你要测的东西稳定性做够好,没必要冰水浴。
用过手动的匀浆器,还未见过自动的,不知转速多少。
在这也顺便请问一下:
做药物在组织分布一定要排干净血液么?
有一种观点是血液流经组织也算是组织的一部分吧?
s032146已经讲得很详细了!
应该是03级药大药代或药分的硕士,向学长或学姐问好!
“然后以10000g的高速匀浆机进行匀浆(时间大约1min),直至获得均一的匀浆液,然后超声5min(为充分溶出药物,但须考虑药物的稳定性)、3500g离心5min,分取上清液。”请教一下,对于很小的组织(卵巢,瘤等)匀浆后液体很少,还用离心取上清测定吗?离心对后期测定能有多大的影响?
组织匀浆的时候需要在冰上操作,加蛋白酶抑制剂.
请问可以用液氮研磨,然后再超声细胞破碎仪破碎吗?
用1000万转速的高速匀浆3-5min,直接4000r离心5min,是不是可以?请教了。
我做过人体的肺组织匀浆,感觉一点都没有红色几乎不可能。
我是把组织剪碎然后匀浆机打匀,然后用超声仪超声。感觉效果很不错,实验结果和预期很接近。
我就是曾经的园内风云人物xx800308,华山抗生素研究所谢欣是也。见效见效,呵呵,隐居三个月以后又高调回归。哈哈哈。可惜以前的密码忘记了,只好另起炉灶。郁闷。
兄弟们,这么好的方法,建议楼主加分啊。超声绝对是个好方法。
