请问各位老师，有人用过高氯酸做为血浆蛋白沉淀剂的吗？由于我的药是酸性的，有的文献中提到加酸来沉淀蛋白，我用液相检测样品没检测到，所以想加高氯酸试一下，但其pH值太小了，小于1，不知道液相柱子能不能受的了。请各位多多指教，谢谢大家。
曾经做药代时，对用高氯酸沉淀蛋白，在摸索方法时试过。对于你所说的柱子能否承受的了的问题：你这只是样品，而且进样量也就在几十微升，而不是流动相的p是小于1的，我觉得没什么太大问题，你可以在摸索条件时用下高氯酸沉淀蛋白。
乙腈甲醇都试过吗？
谢谢您。我用的是4.5%的高氯酸沉淀蛋白，峰形什么的都还可以，但回收的效果没有甲醇的好。
你所说的体外回收率"做体外回收率时，甲醇的回收率最高，但是做体内试验时，乙酸乙酯的回收率较高，",对你说的这体外回收率感到不解，请具体解释下。
建议这位战友对实验这块不要用感觉来判断，用实验数据说话，看谁的回收率高，然后再判断空白是否有干扰。最后再考虑其他方面。
嗯，非常感谢你的建议。体外我是这样做的，空白血浆，然后选择几种不同的有机溶剂做为蛋白沉淀剂或做为液液萃取剂，同样的处理方法，然后进液相检测，因为我没有做标准曲线，只能直观的用峰面积的大小来判断谁的回收率高一些，结果甲醇的峰面积大一些。体内时：大鼠给完药后，不同时间点取血，我将血浆分成两份，一份用 甲醇沉淀蛋白，一种有乙酸乙酯液液萃取，结果每个时间点，乙酸乙酯的峰面积都比甲醇的峰面积大。不知道我是不是有哪些地方做错了。
甲醇沉淀方法，和乙酸乙酯提取的方法，这两者都分别做空白干扰性试验了吗？
你这体外回收率的说法，感觉就很别扭，好像也没这种说法的啊。还有，你说的“同样的处理方法”是怎样的处理方法？
建议你把实验思路理清了，做个实验方案出来，不然有可能到最后方法条件都摸索成功了，给药后的动物血浆样品没了。
建议是要做下基质对你样品有没有干扰，会不会影响样品的响应值。还有回收率计算不能这样简单计算，我曾经也是这样做，后来咨询一个做药动的博士，他建议我好好看看《体内药物分析》（李好枝主编），先把前面方法学做清楚了再去测样品。
没有做，请问空白干扰试验怎么做呀。谢谢！！
嗯，太感谢了。我只是看了看硕博论文。确实应该好好学习下方法。
嗯，是的。感谢您的建议。我再整理下思路。
我的处理方法是：用不同的有机溶剂做蛋白沉淀剂和液液萃取剂，加入有机溶剂后，涡旋，离心后取出上清液一定量，用氮气吹干后，用50微升的甲醇复溶解，然后进样20微升。请您给我指导下。
你做体内药物分析这块，空白干扰性试验，你不会做？拿你试验中的空白血浆（不含药物的），按你的之前相同的处理方法处理该空白样品，进样分析，观察被分析物出峰的地方是否有杂质出峰，（以后再考虑内标出峰地方是否受到干扰，），摸索血浆样品处理方法的时候不能简单的只做下含药的样品，同步也要考虑用该提取试剂处理空白血样观察是否有干扰（对药物和内标）。
甲醇沉淀的也像乙酸乙酯提取时一样，取上清液然后氮气吹干，复溶？请问，甲醇沉淀后是全提完，还是提部分出来？
我们都叫您说的这些叫专属性试验，这些在实验前我都做过了。所选择用的内标和主成份没有干扰，空白血浆也对药物没有干扰。
开始我做的液液萃取法，是将上清液吹干后复溶的。而蛋白沉淀法只取上清液后进液相，但是我的浓度太低了，去蛋白后的溶剂我也取出来吹干后，进样，这样可以增加药物的检测浓度。
你做药物加入到空白血浆时，样品如何配制？
每种处理方法中，药物和内标的面积比，两者有什么差异？
曾经做药代时，对用高氯酸沉淀蛋白，在摸索方法时试过。对于你所说的柱子能否承受的了的问题：你这只是样品，而且进样量也就在几十微升，而不是流动相的p是小于1的，我觉得没什么太大问题，你可以在摸索条件时用下高氯酸沉淀蛋白。
乙腈甲醇都试过吗？
谢谢您。我用的是4.5%的高氯酸沉淀蛋白，峰形什么的都还可以，但回收的效果没有甲醇的好。
你所说的体外回收率"做体外回收率时，甲醇的回收率最高，但是做体内试验时，乙酸乙酯的回收率较高，",对你说的这体外回收率感到不解，请具体解释下。
建议这位战友对实验这块不要用感觉来判断，用实验数据说话，看谁的回收率高，然后再判断空白是否有干扰。最后再考虑其他方面。
嗯，非常感谢你的建议。体外我是这样做的，空白血浆，然后选择几种不同的有机溶剂做为蛋白沉淀剂或做为液液萃取剂，同样的处理方法，然后进液相检测，因为我没有做标准曲线，只能直观的用峰面积的大小来判断谁的回收率高一些，结果甲醇的峰面积大一些。体内时：大鼠给完药后，不同时间点取血，我将血浆分成两份，一份用 甲醇沉淀蛋白，一种有乙酸乙酯液液萃取，结果每个时间点，乙酸乙酯的峰面积都比甲醇的峰面积大。不知道我是不是有哪些地方做错了。
甲醇沉淀方法，和乙酸乙酯提取的方法，这两者都分别做空白干扰性试验了吗？
你这体外回收率的说法，感觉就很别扭，好像也没这种说法的啊。还有，你说的“同样的处理方法”是怎样的处理方法？
建议你把实验思路理清了，做个实验方案出来，不然有可能到最后方法条件都摸索成功了，给药后的动物血浆样品没了。
建议是要做下基质对你样品有没有干扰，会不会影响样品的响应值。还有回收率计算不能这样简单计算，我曾经也是这样做，后来咨询一个做药动的博士，他建议我好好看看《体内药物分析》（李好枝主编），先把前面方法学做清楚了再去测样品。
没有做，请问空白干扰试验怎么做呀。谢谢！！
嗯，太感谢了。我只是看了看硕博论文。确实应该好好学习下方法。
嗯，是的。感谢您的建议。我再整理下思路。
我的处理方法是：用不同的有机溶剂做蛋白沉淀剂和液液萃取剂，加入有机溶剂后，涡旋，离心后取出上清液一定量，用氮气吹干后，用50微升的甲醇复溶解，然后进样20微升。请您给我指导下。
你做体内药物分析这块，空白干扰性试验，你不会做？拿你试验中的空白血浆（不含药物的），按你的之前相同的处理方法处理该空白样品，进样分析，观察被分析物出峰的地方是否有杂质出峰，（以后再考虑内标出峰地方是否受到干扰，），摸索血浆样品处理方法的时候不能简单的只做下含药的样品，同步也要考虑用该提取试剂处理空白血样观察是否有干扰（对药物和内标）。
甲醇沉淀的也像乙酸乙酯提取时一样，取上清液然后氮气吹干，复溶？请问，甲醇沉淀后是全提完，还是提部分出来？
我们都叫您说的这些叫专属性试验，这些在实验前我都做过了。所选择用的内标和主成份没有干扰，空白血浆也对药物没有干扰。
开始我做的液液萃取法，是将上清液吹干后复溶的。而蛋白沉淀法只取上清液后进液相，但是我的浓度太低了，去蛋白后的溶剂我也取出来吹干后，进样，这样可以增加药物的检测浓度。
你做药物加入到空白血浆时，样品如何配制？
每种处理方法中，药物和内标的面积比，两者有什么差异？