大家好，目前在做毕业论文，在测定血药浓度的过程中发现一些问题，令我很是困惑，在这里借这个平台向各位同学们请教一下，情况是这样的：
我的分析物在血浆里面不稳定，所以在动物取血的同时就直接用乙腈沉淀了，然后离心放到冰箱里面直到测定时取出，测定结束后放到冰箱里面去。但是每次测定的值都不一样，第二次测定值往往会较第一次要高。我考察过这个化合物的蛋白结合率，有92%，我个人目前猜测会不会是乙腈沉淀以后，蛋白里面还会不断溶出被分析物吗？因为我并没有把离心好的上清液从沉淀中取出来，而是分析的时候取出一部分。但是理论上讲蛋白沉淀变性以后被结合的被分析物浓度应该不会变化猜对吧。
希望有经验的师兄师姐们能指导一下，让我顺利毕业吧，呵呵。




测定一下绝对回收率就知道了




呵呵，这是有可能的。常用的沉淀血浆蛋白的有机溶剂主要是甲醇和乙腈，相对来讲，乙腈的沉淀能力要强的多、迅速，容易将药物包埋在沉淀中，所以这也是为什么你看到的乙腈沉淀会比较脏一些而甲醇沉淀的则均匀好看的多。所以你第二次测定时由于晃动、更长的溶出时间，因此药物相对第一次测试时更多的释放出来，浓度就会高一些。





谢谢楼上的解释。但是第二次测定的时候，我们有的时间点的数据比第一次要高。这个就很奇怪了，每次我们都是会做线性的，线性也是没问题的。盼各位专家帮忙分析一下。谢谢了




线性是没问题，代表你的检测方法这一项过关。就是因为可能乙腈的沉淀能力要强，将药物包埋在里面，所以你第二次检测时由于存放时间够长，更多的药物从包埋中释放出来，或者由于样品的拿来拿去时的晃动促使更多的药物从包埋中释放出来，因此“第二次测定的时候，我们有的时间点的数据比第一次要高”。