我用的是安捷伦1200液相色谱，用了大概一年多，算比较新的了（仪器应该没问题吧）。柱子是安捷伦原装C18柱（也是用了一年左右）。也我现在做桑叶水提取物的全指纹图谱，重复性很差啊，相同条件下连续进的两针同样的样品，峰形都很不一样，前一针峰都分开了，后一针可能又叠合在一起了。很苦恼啊，麻烦各位高手分析一下该如何解决？
如果你的仪器的流速、梯度比例准确性、灯能量等都定期验证，保证没问题的话，我怀疑你的色谱条件有问题，但是从直觉上我觉得你的仪器应该没有好好验证过，简单测一下各个泵的流速，梯度比例，灯的测试在chemstion诊断模式下可以来测试的；
当然了，其他原因也是有的，你的色谱柱的柱效如何，样品是否稳定，你能确定分开的和分不开的是同样的物质么？呵呵，自己再排除排除
是否是系统未平衡好？
以及流动相是否混合均匀了？有些流动相在液相上很难达到平稳，比如含有离子对试剂的流动相
楼主应先排除一下是否是你的仪器问题，最好做一下仪器验证；
如果仪器没有问题楼主要测一下你的溶液稳定性；还有就是你上一针是否对下一阵有影响，是否有残留？楼主要耐心一点，一点点的排除。
前一针走完了，在用流动相平衡之前，先用纯甲醇走30分钟左右，恢复柱子洁净度，再平衡进样，重复性就好了。以前碰到类似情况。
我怀疑你是在跑梯度，柱子没有平衡好就走下一针了
我想是你前一针峰没走完，前一针后面还是什么杂质峰，第一针没走完你又进第二针，当然分不开了。你可以试着让第一针走的足够长，看看后面是否可有杂质峰
谢谢楼上各位的回答，仪器应该是没问题的，前面一直有人在用的，各项指标都很正常，我的流动相是乙腈和0.1%的磷酸，可能是我流速确实设得太低了，我用的是0.2ml/min，其实我每针都是等基线跑平了，才进下一针的，我再试着将每针的间隔延长些，看是否稳定性会变好。
现在好了吗，你改了流速之后，我也是0.3ml/min，根本没有重复性。问问你是否有所改进
还是重复性不好，我当然也没有等那么久去试过，我一般就等四五十分钟左右，其实我基线在跑半个小时后就是平的了。我不知道是不是我的物质比较多，容易残留在柱子中，可能造成没有重复性。
首先，样品的稳定性如何？其次，进样量是否过大，导致残留从而影响分离度和系统适用性
0.2ml/min，你用的UPLC？指纹图谱成分复杂，大多是要用梯度洗脱的。不能单看基线走平了。
我用0.7ml/min的时候，有了重复性。
没有UPLC哈，那个太好了买不起。我想可能也需要梯度洗脱吧，成分确实挺多的，就是都物质都堆在一块出峰，想请教下梯度洗脱能不能把峰分开？
我试了N次，我的流速不能调那么高，否则峰更分不开了
样品的稳定性还是好的，就进样量而言的话，这个1200是自动控制的，都是20微升。
在反相色谱中，一般流速对分离的影响远没有有机相和pH影响更显著。梯度：一般先用低比例有机相，然后逐渐换成高比例有机相。多去看看分析方法开发的书吧。
可能流速过低时仪器的流速就不是很准了吧，还有我觉得，很有可能的就是上一针对下一针有影响，可以在相同条件下再进一针，看看后来两针有没有共同性，来判断是不是残留的影响
1、进样时间过短，上针结束后未出来物质残留到下一针了。
2、溶液稳定性不好，降解出新物质。
3、你的条件也太那个啥了吧，不是UPLC，流速0.2ml/min，你的方法应该有问题，还是调整一下色谱条件吧。
嗯，谢谢你的指点。我也是刚接触液相不久，还是个新手。
确实我的流速是算很低的了，一般我看到都是0.6到1之间。但我又做了很多实验，还是发现我这个样品在0.2的时候峰图是最好的，就是重复性不好。可能还是要用梯度试下吧
谢谢了，我也说不清是不是物质残留，我的样品在20多分钟后基线就开始跑平了，而且我最长的时候等了快两个小时，20多分钟后面的基线也一直是平的，没有出现峰，我才进的针。我想可能还是我条件上有些问题吧。
不是UPLC，0.2mL/min仪器泵的精度不一定能准确；
多平行走几针，4-5针的，全都不一样，有可能是化合物的问题，不稳定导致，有的一样，有的不一样，峰位，峰形变化，但是相对保留时间差不多，应该就是泵的问题了，老化？找工程师报修吧。
我怀疑是楼主有部分物质没冲洗出来，建议将方法后大比例有机相梯度比例冲洗的时间可以适当延长，看是否还有未洗脱下的物质。
我认为，有可能是上一针样品走完之后你没有洗一下柱子并充分预平衡。导致上一针样品在色谱柱上仍由残留，会影响下一针的峰形和分离度。
如果你的仪器的流速、梯度比例准确性、灯能量等都定期验证，保证没问题的话，我怀疑你的色谱条件有问题，但是从直觉上我觉得你的仪器应该没有好好验证过，简单测一下各个泵的流速，梯度比例，灯的测试在chemstion诊断模式下可以来测试的；
当然了，其他原因也是有的，你的色谱柱的柱效如何，样品是否稳定，你能确定分开的和分不开的是同样的物质么？呵呵，自己再排除排除
是否是系统未平衡好？
以及流动相是否混合均匀了？有些流动相在液相上很难达到平稳，比如含有离子对试剂的流动相
楼主应先排除一下是否是你的仪器问题，最好做一下仪器验证；
如果仪器没有问题楼主要测一下你的溶液稳定性；还有就是你上一针是否对下一阵有影响，是否有残留？楼主要耐心一点，一点点的排除。
前一针走完了，在用流动相平衡之前，先用纯甲醇走30分钟左右，恢复柱子洁净度，再平衡进样，重复性就好了。以前碰到类似情况。
我怀疑你是在跑梯度，柱子没有平衡好就走下一针了
我想是你前一针峰没走完，前一针后面还是什么杂质峰，第一针没走完你又进第二针，当然分不开了。你可以试着让第一针走的足够长，看看后面是否可有杂质峰
谢谢楼上各位的回答，仪器应该是没问题的，前面一直有人在用的，各项指标都很正常，我的流动相是乙腈和0.1%的磷酸，可能是我流速确实设得太低了，我用的是0.2ml/min，其实我每针都是等基线跑平了，才进下一针的，我再试着将每针的间隔延长些，看是否稳定性会变好。
现在好了吗，你改了流速之后，我也是0.3ml/min，根本没有重复性。问问你是否有所改进
还是重复性不好，我当然也没有等那么久去试过，我一般就等四五十分钟左右，其实我基线在跑半个小时后就是平的了。我不知道是不是我的物质比较多，容易残留在柱子中，可能造成没有重复性。
首先，样品的稳定性如何？其次，进样量是否过大，导致残留从而影响分离度和系统适用性
0.2ml/min，你用的UPLC？指纹图谱成分复杂，大多是要用梯度洗脱的。不能单看基线走平了。
我用0.7ml/min的时候，有了重复性。
没有UPLC哈，那个太好了买不起。我想可能也需要梯度洗脱吧，成分确实挺多的，就是都物质都堆在一块出峰，想请教下梯度洗脱能不能把峰分开？
我试了N次，我的流速不能调那么高，否则峰更分不开了
样品的稳定性还是好的，就进样量而言的话，这个1200是自动控制的，都是20微升。
在反相色谱中，一般流速对分离的影响远没有有机相和pH影响更显著。梯度：一般先用低比例有机相，然后逐渐换成高比例有机相。多去看看分析方法开发的书吧。
可能流速过低时仪器的流速就不是很准了吧，还有我觉得，很有可能的就是上一针对下一针有影响，可以在相同条件下再进一针，看看后来两针有没有共同性，来判断是不是残留的影响
1、进样时间过短，上针结束后未出来物质残留到下一针了。
2、溶液稳定性不好，降解出新物质。
3、你的条件也太那个啥了吧，不是UPLC，流速0.2ml/min，你的方法应该有问题，还是调整一下色谱条件吧。
嗯，谢谢你的指点。我也是刚接触液相不久，还是个新手。
确实我的流速是算很低的了，一般我看到都是0.6到1之间。但我又做了很多实验，还是发现我这个样品在0.2的时候峰图是最好的，就是重复性不好。可能还是要用梯度试下吧
谢谢了，我也说不清是不是物质残留，我的样品在20多分钟后基线就开始跑平了，而且我最长的时候等了快两个小时，20多分钟后面的基线也一直是平的，没有出现峰，我才进的针。我想可能还是我条件上有些问题吧。
不是UPLC，0.2mL/min仪器泵的精度不一定能准确；
多平行走几针，4-5针的，全都不一样，有可能是化合物的问题，不稳定导致，有的一样，有的不一样，峰位，峰形变化，但是相对保留时间差不多，应该就是泵的问题了，老化？找工程师报修吧。
我怀疑是楼主有部分物质没冲洗出来，建议将方法后大比例有机相梯度比例冲洗的时间可以适当延长，看是否还有未洗脱下的物质。
我认为，有可能是上一针样品走完之后你没有洗一下柱子并充分预平衡。导致上一针样品在色谱柱上仍由残留，会影响下一针的峰形和分离度。