想和大家讨论讨论多糖的HPLC分析，我们试验室用的液相是C18柱，紫外检测器，做多糖含量及纯度检测，这样的装备够不够用呀？是不是做前必须衍生化或有其它方法，如用示差折射仪作检测器，是不是不需衍生化？
我师姐就是做多糖的，所以我也略知一二。HPLC检测多糖为大分子要用凝胶柱并且有一定的分子量范围，看你要测什么糖了 。紫外可以了，最好是PAD，HPLC不用衍生化，标准品中检所买的很贵。
其他方法：比色法，GC
谢谢waynekyw,不过为什么我看许多文献都讲要对多糖进行衍生化，再者多糖中并不含共轭结构，用紫外的效果会好吗？PAD是什么？
多糖衍生化主要是把OH转为甲基或乙酰基，这样可以进行GC，hplc就不用了。
没有共轭结构但是只要有发色团也可以检测到。PAD是二极管矩阵监测器，也是紫外了，不过可以记录所有波长的吸收，对你选择波长很方便了。
你做纯度分析,还是单糖组成分析啊?如果是前者应该用凝胶柱,我用过TSK的,检测器应该用示差检测器,紫外肯定不行,正如你所说多糖没有共轭结构,也没有发色基团,如果你做想用HPLC作单糖组成,建议购买MACHEREY-NAGEL公司的NUCLEOGEL SUGARPb糖分析专用柱，这样多糖水解后可以直接上柱，以水洗脱就可以，一般的7种常见单糖都可以分开，氨基柱有的糖分不开，特别是一些同分异构体。有什么问题可以联系我chenly@tasly.com
多糖的HPLC检测可以用蒸发光散射检测器或示差折光检测器，首先用液质连用确定一下你的多糖的分子量范围以选择合适的硅胶柱，TSK柱效果不错。
多糖的分析是一个大问题啊！和大家讨论一下吧，经综合各种文献我认为
多糖结构分析内容：要搞清
1. 多糖的单糖组成（种类、比例）
2. 每个单糖残基的D-、L-构型，吡喃环式或呋喃环式
3. 羟基被取代情况（糖苷键的位置）
4. 糖苷键及构型（α、β异头异构体）
5. 重复单元
方法：
1、单糖组成：（对照品：葡萄糖、岩藻糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖）
a：水解： 纸层析
薄层层析
气相色谱（糖氰乙酸酯衍生物、糖醇乙酸酯）
液相色谱（ZORBAX-NH2、HRC-NH2、RID）首选气相，灵敏度高，液相RSD、ELSD灵敏度低
b：TFA酸解：气相色谱（乙酰化物）
c：甲醇解：气相色谱（三甲基硅醚）
2：高碘酸钠氧化和Smith降解
a：每摩尔己糖基的高碘酸消耗量、甲酸释放量。
（目的：判断可氧化糖基与不可氧化糖基之比例）
b：Smith降解完全水解，气相分析，如有葡萄糖（表示有1-3键糖基）、甘油（有1-6或1-2糖基）、甲酸（有1-6糖基）
Smith降解部分水解，说明主干糖苷键类型。
3：甲基化分析（Hakrmor法）-支链分布
多糖—甲基化—水解—还原得甲基化单糖醇—乙酰化得糖醇衍生物—GC-MS检测。
对照品 2,3,4,6-四甲基葡萄糖 糖苷键类型 1—
2,4,6- 三甲基葡萄糖 1—3
2,3,4-三甲基葡萄糖 1—6
2,4-二甲基葡萄糖 1—3，6
4：IR图谱解析
a：吡喃环式或呋喃环式
α、β异头异构体
5：1HNMR及13CNMR解析（构型）
6：纯度检查：
a： 紫外吸收光谱（280、260）
b：电泳（琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺凝胶、醋酸纤维素薄膜）
c：薄层色谱（多糖不水解）
7：X射线衍射，立体构型。
好多啊！
多糖的HPLC分析，用得较多用HPGPC测分子量及分子量分布。一般纯多糖紫外吸收较弱，多用RID或ELSD。
至于含量测定多用硫酸蒽酮比色或苯酚硫酸法。
多糖含量测定的方法主要分为以下两大类
一类是利用组成多糖的单糖的缩合反应而建立的方法：
如咔唑－硫酸法、蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸等比色的方法。该法测定时方法学干扰较大，但由于目前国内的实验条件，多糖的含量测定仍主要采用该方法。
另一类则是直接测定多糖本身而建立的方法：
如高效液相色谱法，但该法需要多糖的纯品。采用HPLC
测定糖，选择合适的检测器很重要：
（1）RI检测器具有稳定、易于操作、样品不被破坏等特点，但该法受温度和流动相组成的影响，不能使用梯度洗脱。
（2）uv-vis检测器：因为糖只在近紫外区190nm有吸收，流动相和样品中的杂质会影响多糖检测的灵敏度。若采用柱前衍生或柱后衍生反应，生成具有强紫外吸收的物质，可大大提高灵敏度。
（3)ELSD方法可解决上述问题，可与梯度洗脱相容，已有研究者应用HPLC-ELSD直接测定二糖海藻糖及D-木糖等单糖，但多糖的含量测定还未见报道。
多糖的纯度测定方法主要有：比旋度法、超离心法、高压电泳法、凝胶过滤法、纸层析法、冻融法、光谱扫描法，具体内容我这里有一篇参考文献
多糖类药物的质量标准研究现状及其进展.caj(33.87k)
PDA=photo diode array
DAD=Diode-Array Detector
即二极管阵列检测器
乳糖酸用液相选用什么流动相呀 ？
实际上上面提到的PAD并不是什么二级阵列管
而是脉冲安培检测器（pulsed ampere detector），
其作用原理为：单糖或寡糖在碱性条件下电离，通过阴离子柱分离，然后用脉冲检测器检测，可用于单糖或寡糖的定性和定量
我觉得还是用示差检测器比较好，另外你要首先确定你的多糖的分子量范围，然后选择合适的凝胶柱，即可。 4 1 2 3 4 下一页 尾页
我师姐就是做多糖的，所以我也略知一二。HPLC检测多糖为大分子要用凝胶柱并且有一定的分子量范围，看你要测什么糖了 。紫外可以了，最好是PAD，HPLC不用衍生化，标准品中检所买的很贵。
其他方法：比色法，GC
谢谢waynekyw,不过为什么我看许多文献都讲要对多糖进行衍生化，再者多糖中并不含共轭结构，用紫外的效果会好吗？PAD是什么？
多糖衍生化主要是把OH转为甲基或乙酰基，这样可以进行GC，hplc就不用了。
没有共轭结构但是只要有发色团也可以检测到。PAD是二极管矩阵监测器，也是紫外了，不过可以记录所有波长的吸收，对你选择波长很方便了。
你做纯度分析,还是单糖组成分析啊?如果是前者应该用凝胶柱,我用过TSK的,检测器应该用示差检测器,紫外肯定不行,正如你所说多糖没有共轭结构,也没有发色基团,如果你做想用HPLC作单糖组成,建议购买MACHEREY-NAGEL公司的NUCLEOGEL SUGARPb糖分析专用柱，这样多糖水解后可以直接上柱，以水洗脱就可以，一般的7种常见单糖都可以分开，氨基柱有的糖分不开，特别是一些同分异构体。有什么问题可以联系我chenly@tasly.com
多糖的HPLC检测可以用蒸发光散射检测器或示差折光检测器，首先用液质连用确定一下你的多糖的分子量范围以选择合适的硅胶柱，TSK柱效果不错。
多糖的分析是一个大问题啊！和大家讨论一下吧，经综合各种文献我认为
多糖结构分析内容：要搞清
1. 多糖的单糖组成（种类、比例）
2. 每个单糖残基的D-、L-构型，吡喃环式或呋喃环式
3. 羟基被取代情况（糖苷键的位置）
4. 糖苷键及构型（α、β异头异构体）
5. 重复单元
方法：
1、单糖组成：（对照品：葡萄糖、岩藻糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖）
a：水解： 纸层析
薄层层析
气相色谱（糖氰乙酸酯衍生物、糖醇乙酸酯）
液相色谱（ZORBAX-NH2、HRC-NH2、RID）首选气相，灵敏度高，液相RSD、ELSD灵敏度低
b：TFA酸解：气相色谱（乙酰化物）
c：甲醇解：气相色谱（三甲基硅醚）
2：高碘酸钠氧化和Smith降解
a：每摩尔己糖基的高碘酸消耗量、甲酸释放量。
（目的：判断可氧化糖基与不可氧化糖基之比例）
b：Smith降解完全水解，气相分析，如有葡萄糖（表示有1-3键糖基）、甘油（有1-6或1-2糖基）、甲酸（有1-6糖基）
Smith降解部分水解，说明主干糖苷键类型。
3：甲基化分析（Hakrmor法）-支链分布
多糖—甲基化—水解—还原得甲基化单糖醇—乙酰化得糖醇衍生物—GC-MS检测。
对照品 2,3,4,6-四甲基葡萄糖 糖苷键类型 1—
2,4,6- 三甲基葡萄糖 1—3
2,3,4-三甲基葡萄糖 1—6
2,4-二甲基葡萄糖 1—3，6
4：IR图谱解析
a：吡喃环式或呋喃环式
α、β异头异构体
5：1HNMR及13CNMR解析（构型）
6：纯度检查：
a： 紫外吸收光谱（280、260）
b：电泳（琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺凝胶、醋酸纤维素薄膜）
c：薄层色谱（多糖不水解）
7：X射线衍射，立体构型。
好多啊！
多糖的HPLC分析，用得较多用HPGPC测分子量及分子量分布。一般纯多糖紫外吸收较弱，多用RID或ELSD。
至于含量测定多用硫酸蒽酮比色或苯酚硫酸法。
多糖含量测定的方法主要分为以下两大类
一类是利用组成多糖的单糖的缩合反应而建立的方法：
如咔唑－硫酸法、蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸等比色的方法。该法测定时方法学干扰较大，但由于目前国内的实验条件，多糖的含量测定仍主要采用该方法。
另一类则是直接测定多糖本身而建立的方法：
如高效液相色谱法，但该法需要多糖的纯品。采用HPLC
测定糖，选择合适的检测器很重要：
（1）RI检测器具有稳定、易于操作、样品不被破坏等特点，但该法受温度和流动相组成的影响，不能使用梯度洗脱。
（2）uv-vis检测器：因为糖只在近紫外区190nm有吸收，流动相和样品中的杂质会影响多糖检测的灵敏度。若采用柱前衍生或柱后衍生反应，生成具有强紫外吸收的物质，可大大提高灵敏度。
（3)ELSD方法可解决上述问题，可与梯度洗脱相容，已有研究者应用HPLC-ELSD直接测定二糖海藻糖及D-木糖等单糖，但多糖的含量测定还未见报道。
多糖的纯度测定方法主要有：比旋度法、超离心法、高压电泳法、凝胶过滤法、纸层析法、冻融法、光谱扫描法，具体内容我这里有一篇参考文献
多糖类药物的质量标准研究现状及其进展.caj(33.87k)PDA=photo diode array
DAD=Diode-Array Detector
即二极管阵列检测器
乳糖酸用液相选用什么流动相呀 ？
实际上上面提到的PAD并不是什么二级阵列管
而是脉冲安培检测器（pulsed ampere detector），
其作用原理为：单糖或寡糖在碱性条件下电离，通过阴离子柱分离，然后用脉冲检测器检测，可用于单糖或寡糖的定性和定量
我觉得还是用示差检测器比较好，另外你要首先确定你的多糖的分子量范围，然后选择合适的凝胶柱，即可。 4 1 2 3 4 下一页 尾页