各位前辈,小女子最近在过Sephadex A50柱子,想请教各位一些问题。
我按如下方式进行预处理: A-50 悬于蒸馏水内,比例1: 150~200 ,时间40~60 分钟.
0.5M NaOH浸泡 , 30分钟, 抽滤,水洗至中性,
0.5M HCl浸泡 , 30分钟, 抽滤,水洗至中性,
0.5M NaOH浸泡 , 30分钟,抽滤, 水洗至中性,缓冲液平衡.再生的时候先用2mol/L的NaCl洗至蛋白呈阴性,再按碱-酸-碱方式处理。据说凝胶一旦溶胀就不能干,所以每次抽滤都不会抽干。但是A50的粘附性较G50强,粘在烧杯上哪都是,很难冲洗下来。每处理一次都会浪费很多。请问有什么好方法能减少浪费???另外,A50可以抽干吗?装柱的时候有时有很多小气泡,我超声5分钟后,气泡减少了,但是上层漂浮了很多胶,请问是不是超声会破坏A50的结构?如何解决气泡问题?请高人指点迷津。多谢!
我按如下方式进行预处理: A-50 悬于蒸馏水内,比例1: 150~200 ,时间40~60 分钟.
0.5M NaOH浸泡 , 30分钟, 抽滤,水洗至中性,
0.5M HCl浸泡 , 30分钟, 抽滤,水洗至中性,
0.5M NaOH浸泡 , 30分钟,抽滤, 水洗至中性,缓冲液平衡.再生的时候先用2mol/L的NaCl洗至蛋白呈阴性,再按碱-酸-碱方式处理。据说凝胶一旦溶胀就不能干,所以每次抽滤都不会抽干。但是A50的粘附性较G50强,粘在烧杯上哪都是,很难冲洗下来。每处理一次都会浪费很多。请问有什么好方法能减少浪费???另外,A50可以抽干吗?装柱的时候有时有很多小气泡,我超声5分钟后,气泡减少了,但是上层漂浮了很多胶,请问是不是超声会破坏A50的结构?如何解决气泡问题?请高人指点迷津。多谢!