最近在做梯度试验，走梯度时水相和有机相比例是一样的，为什么走出来的梯度峰不一样？请教一下大家，谢谢




若是同一个梯度条件，应该是近似一样的梯度峰；lz说的水相和有机相比例一样不知是不是应该理解成同一梯度条件？






　不知所云？

　什么叫水相和有机相比例一样？





依据设定好的梯度时间调整流动相的比例（流动相比例不变），在走空白溶剂的时候梯度峰的出峰时间和峰型就发生变化，每次的结果都不一样






　调整流动相比例，括号里说：流动相比例不变，流动相比例不变还叫啥梯度？

　这是什么表达能力啊？？





是这个意思 就是保证进入液相的有机相和水相混合比例与之前梯度条件一样，但调整了进入液相之前流动相的比例。




可以这样理解不“改变了单独某个流动相A中两相的比例，但按时间来计算，比如说到10min时，两相的比例仍与不改变单个流动相时要求的比例一致”？但你若决定改流动相了，就按改过的流动相做就可以了吧，这样的话梯度峰应给是一样的啊；至于跟没改流动相前是否一致，我也没注意过，不好说，还有梯度若不是很平缓，要多走几针空梯度以平衡柱子，不然梯度峰是会有变化的，一般是越来越小；望能尽快解决




没看明白LZ说的问题，如果你的实验方法是梯度洗脱，那就是说在一个实验过程中（一针），你的流动相是不断变化的，怎么可能有机相和水相的比例是一样的？如果你在整个实验过程中，流动相的比例没有变化，这个不叫梯度，这个叫等度洗脱。
我理解你的意思是：在梯度洗脱过程中，样品锋的出峰时间重复性不好！这个问题可能是你设计的实验方法的流动相变化太快，而实际上液相泵变化不过来，导致试验中流动相比例不是你认为的比例，这样会导致出锋时间重复性差，还有色谱柱平衡时间太短，试着调节流动相比例缓慢变换。




我知道你的问题了。
请注意你的样品浓度是否一样。
柱温是否控制了。
流动相的梯度是否大于20%-80%。
是否平衡时间充分，一般250mm长的柱子，请平衡15min，如果使用的久了可能平衡的时间需要25min。
做梯度实验一定要有充分的平衡时间啊。




谢谢各位，我的问题解决了，宝贵意见值得学习！





怎么解决的？赶紧分享经验啊