我们在研发一个药物的时候，EP6.0里面有记载他的有关物质测量的流动相配制方法，是使用单泵流动相的，直到EP7.1都未有发生改变，我们测杂质一直使用该方法。后来EP7.2出来了，有关物质检测方法完全改变了，从单泵变成A、B两种溶液用双泵进行梯度洗脱。
开始以为方法就这样改我们就这样做，结果发现做EP7.2的方法出现了问题。官方给出的杂质分离图谱在40分钟换梯度的时候，梯度变化明显，该出的各个单杂质峰都分离度很高。而我们做的时候前40分钟单杂分离度也不错，但是到了40分钟出问题，梯度附近是有单杂杂质峰出来的，但是我们做的时候却出现一个很大的峰，把附近的杂质峰都掩盖起来了，有时候还杂乱无章。
开始以为方法就这样改我们就这样做，结果发现做EP7.2的方法出现了问题。官方给出的杂质分离图谱在40分钟换梯度的时候，梯度变化明显，该出的各个单杂质峰都分离度很高。而我们做的时候前40分钟单杂分离度也不错，但是到了40分钟出问题，梯度附近是有单杂杂质峰出来的，但是我们做的时候却出现一个很大的峰，把附近的杂质峰都掩盖起来了，有时候还杂乱无章。
时间 (min) 1. 柱子的粒径，药典规定，粒径可以比药典的低，但不能高。所以你的5um是不合适的，但应该不是造成梯度的主要原因呢； 2.国产化学试剂。这个影响可能比较大。这些普通试剂国外卖的也不贵，但质量更可靠。关注试剂纯度，曾经遇到一同事讲基线老不好，我看了后发现有个试剂为生化纯，只有90%纯度，更换国外试剂后，基线改善很大。 3.离子对试剂用起来需要平衡柱子很长时间，建议平衡过夜，然后连续走空白考察梯度峰是否改善。 4.如果还不行，换其他仪器或其他品牌的仪器来试试。 换个3.5um的柱子吧 提高分离度 也许就是这个原因 Xbridge的也就7-8千元 换个3.5um的柱子吧 提高分离度 也许就是这个原因 Xbridge的也就7-8千元 |