本人在进行耐用性考察，使用的是安捷伦1260DAD检测器，4元泵，流动相是乙腈，甲醇和磷酸盐缓冲盐溶液按比例混合
本来是打算用4元泵中的其中3个泵去用混合器以不同比例混合以上三者去考察检测方法对流动相比例改变是否耐用，但是老大说不可取，认为混合器这样混合会产生缓冲盐结晶固体堵住管路，且混合时候液体会变冷，热胀冷缩会造成影响，要我预先使用几个瓶子配制不同比例流动相去用单泵进样考察耐用性。
请问各位这两种方法其实是否有差异？该怎样去选择？
您的老大考量绝对正确。一般说来，如果只是简单的有机溶剂，水（要互溶），我们是可以用不同的泵来做。但是有盐类就要好好考虑溶解度的问题。如果没有盐类，在您配流动相时，要分别量出水的量，然后量出有机溶剂的量，再混合配成流动相，那结果和两个泵混合出来是非常接近的。当然也不是每一个仪器都是如此。沃特斯的2695就可以得到很类似的结果。其它的仪器，预祝您好运。沃特斯的仪器比较贵，但是人家贵，贵的有道理。尤其做梯度是就看出来了。不信，拿您的样品，使用同样的色谱条件，找沃特斯帮您跑一跑，看看结果如何。包您吓一跳。
国内使用A仪器真的非常多哈，他们在销售领域能力，111深刻体会！限于地球太小，不易都说哈
上次老板去宝岛，基本都是使用W的，据说老美A,W都用,但是我想能够得到很好认可的，（在国内混的不算），估计都有数哈
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对于含盐流动相，千万要慎重，特别是使用USP方法的，经常用盐很高，图省事，问题一退哈，本来仪器一般，再瞎整，呵呵
上次有朋友就是把盐堵在六通阀里，幸亏111还有一把刷子，牺牲了中午时间，整 了一下，OK
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前几天又是另外的一个奇怪的举动，呵呵，又牺牲了111的中午时间哈，不过，认识又深了一步哈
======
所以，我们在学习的过程中，一定要听听老师、有经验的同事、主管们的意见哈，总是认为自己很能，很多时候虽然做成功了，其实也埋了隐患
嗯，谢谢你的解答，我还想请教你一个问题。这个问题比较的棘手，老大想了好久没想到好的解决方案。
我们在研发一个药物的时候，EP6.0里面有记载他的有关物质测量的流动相配制方法，是使用单泵流动相的，直到EP7.1都未有发生改变，我们测杂质一直使用该方法。后来EP7.2出来了，有关物质检测方法完全改变了，从单泵变成A、B两种溶液用双泵进行梯度洗脱。
开始以为方法就这样改我们就这样做，结果发现做EP7.2的方法出现了问题。官方给出的杂质分离图谱在40分钟换梯度的时候，梯度变化明显，该出的各个单杂质峰都分离度很高。而我们做的时候前40分钟单杂分离度也不错，但是到了40分钟出问题，梯度附近是有单杂杂质峰出来的，但是我们做的时候却出现一个很大的峰，把附近的杂质峰都掩盖起来了，有时候还杂乱无章。
本来是打算用4元泵中的其中3个泵去用混合器以不同比例混合以上三者去考察检测方法对流动相比例改变是否耐用，但是老大说不可取，认为混合器这样混合会产生缓冲盐结晶固体堵住管路，且混合时候液体会变冷，热胀冷缩会造成影响，要我预先使用几个瓶子配制不同比例流动相去用单泵进样考察耐用性。
请问各位这两种方法其实是否有差异？该怎样去选择？
您的老大考量绝对正确。一般说来，如果只是简单的有机溶剂，水（要互溶），我们是可以用不同的泵来做。但是有盐类就要好好考虑溶解度的问题。如果没有盐类，在您配流动相时，要分别量出水的量，然后量出有机溶剂的量，再混合配成流动相，那结果和两个泵混合出来是非常接近的。当然也不是每一个仪器都是如此。沃特斯的2695就可以得到很类似的结果。其它的仪器，预祝您好运。沃特斯的仪器比较贵，但是人家贵，贵的有道理。尤其做梯度是就看出来了。不信，拿您的样品，使用同样的色谱条件，找沃特斯帮您跑一跑，看看结果如何。包您吓一跳。
国内使用A仪器真的非常多哈，他们在销售领域能力，111深刻体会！限于地球太小，不易都说哈
上次老板去宝岛，基本都是使用W的，据说老美A,W都用,但是我想能够得到很好认可的，（在国内混的不算），估计都有数哈
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对于含盐流动相，千万要慎重，特别是使用USP方法的，经常用盐很高，图省事，问题一退哈，本来仪器一般，再瞎整，呵呵
上次有朋友就是把盐堵在六通阀里，幸亏111还有一把刷子，牺牲了中午时间，整 了一下，OK
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前几天又是另外的一个奇怪的举动，呵呵，又牺牲了111的中午时间哈，不过，认识又深了一步哈
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所以，我们在学习的过程中，一定要听听老师、有经验的同事、主管们的意见哈，总是认为自己很能，很多时候虽然做成功了，其实也埋了隐患
嗯，谢谢你的解答，我还想请教你一个问题。这个问题比较的棘手，老大想了好久没想到好的解决方案。
我们在研发一个药物的时候，EP6.0里面有记载他的有关物质测量的流动相配制方法，是使用单泵流动相的，直到EP7.1都未有发生改变，我们测杂质一直使用该方法。后来EP7.2出来了，有关物质检测方法完全改变了，从单泵变成A、B两种溶液用双泵进行梯度洗脱。
开始以为方法就这样改我们就这样做，结果发现做EP7.2的方法出现了问题。官方给出的杂质分离图谱在40分钟换梯度的时候，梯度变化明显，该出的各个单杂质峰都分离度很高。而我们做的时候前40分钟单杂分离度也不错，但是到了40分钟出问题，梯度附近是有单杂杂质峰出来的，但是我们做的时候却出现一个很大的峰，把附近的杂质峰都掩盖起来了，有时候还杂乱无章。
时间 (min) 楼上的过滤水的方法，我还是第一次听说哈，佩服 另外什么是C18滤膜？ A,B分别怎么配置的？ 个人以为还是出在试剂上，但不排除系统不干净的可能 根据你的说法，我觉得那个大峰应该是属于空白的梯度峰引起的，可以和空白做个对比。梯度峰的出现不光和试剂、谁的质量有关系，更与仪器的状态和品牌有关系。一般来讲，新购买的仪器梯度要比使用多年的旧仪器更好些。我曾遇到一个问题，采用某品牌仪器多台，均在一杂质位置有干扰，但换了另一家仪器，空白就一点干扰都没有了。 在购买中，我也不知道怎样的滤膜。使用的仪器和柱子都是新的，配制方法： 溶液A: 溶解 34.02 g 磷酸二氢钾于930 mL 水中，用水稀释至1000 mL (缓冲盐溶液);溶解 21.21 g 四丁基硫酸氢铵于225 mL 缓冲盐溶液中，用相同溶剂稀释至 250.0 mL; 用300 g/L 氢氧化钾溶液调 pH 至7.5; 流动相 A: 2.0 mL 溶液 A 与300 mL 乙腈和700 mL水混合; 流动相 B: 2.0 mL 溶液 A 与 300 mL 水和700 mL乙腈混合; 但是我们所使用的柱子粒径与药典不同，我们使用的是5um，药典规定是3.5um 使用的仪器和柱子都是新的，进空白梯度洗脱也同样出现此峰 1.按照LZ的说法，这个峰是空白梯度峰，对杂质的测定有干扰，那么这个方法即为不适用的。这样的话，做耐用性是没有意义的（不明白为什么最后拿等度做耐用性） 2.从您的描述来看，过滤水之后梯度峰变小。这个梯度峰可能是流动相的原因。建议换屈臣氏的水或者色谱级试试，另外不知道您是否对流动相进行抽滤。可考察流动相不抽滤仅超声与抽滤之后的梯度峰变化 前面有一位朋友说您应该进样空白，这是一定要做的。还有，您大峰出的位置是40分钟左右，而40分钟刚好是您梯度的终点，之后您就回到梯度的起始点。首先一个问题就是看看您仪器的死体积是多少，您的流速是2 mL/min，就可以知道流动相要过了40几分钟以后才能开始回到起始点。我说仪器的死体积是两个流动相（泵A，泵B）混合完全后到达柱子顶端的时间（柱子死体积是另外一回事）。任何柱子在交换流动相组成时，尤其末了都可能会出现这种情形。我会把最后40分钟，延长到45分钟，看看结果如何。照理说，任何峰出现在40分钟加死体积的时间以后，都不能用的（不算是正式的峰）。 1、你误解我意思了，做耐用性是另外一个药物的方法验证，我后来说的是另外一个药物 2、每次都会抽滤和超声，没有考擦过不超声不抽滤的情况，因为老大规定必须超声和抽滤 谢谢你的宝贵建议。你的意思是因为仪器死体积的存在使得在40分钟时并未回到梯度洗脱的起始点，需要40几分钟以后才能回到梯度洗脱起点？那么如何才能知道我所使用的仪器的仪器死体积是多少呢？而梯度洗脱的终点是否必须在确保排除仪器死体积以后才确定下来呢？ 老头很高兴，您完全了解我要解释的内容。老头出生在青岛，随着民国跟着父母流亡台湾。大学毕业来美，到今天整整40年。还能够用中文与各位交通化学，自己感到十分的欣慰。其实我的英文很不错的，可是在写中文的时候，尽量避免英文的加入。就像我在美国写报告，不加中文是一个道理。（其实有例外，唯一的例外。我在和黄向FDA申报IND的时候，用了中文。因为报的是中药，所以用了中文的名字，就那三个中文字）。 3 1 2 3 下一页 尾页 |