【讨论】色谱技术实践问答区
是老版主无名英雄为了方便大家讨论而开的帖子，为本版战友解决了许多实际问题，也取得了相当不错的效果。
【公告】 HPLC专家解答专用贴
是cpuwjb主任为了更好的方便HPLC专家的解答以及需要帮助的战友求助，特建立HPLC专家解答专用贴。
在此，再次感谢HPLC专家的无私奉献！
同时，也非常感谢那些曾经在“色谱技术实践问答区”积极讨论的战友。
希望我们的新战友向他们学习，积极参与HPLC实践技术的讨论。
HPLC问题SOS求助规则
本规则根据天舒主任起草的药品标准SOS专帖改编而成，如有好的建议，请跟贴说明或pm我，谢谢！
--------求助与应助者必读
一、求助与应助规则
1、本帖只是药品、食品的HPLC技术问题求助帖，与HPLC技术问题无关的帖请勿在此求助!
2、求助者发帖前请先搜索一下你所求助的HPLC技术问题是否已经有战友求助过，若没有求助过，再发帖求助。
3、求助者发帖请尽量按照如下格式发帖求助：
[药品名称]：
[色谱条件]：
[色谱图]：
4、应助不限于格式与方式，直接帖出也可，附件也可，传真E-mail也可，但要尽可能表达清楚您的意思!
5、求助者得到帮助后最好跟帖说明一下，您根据应助者提供的资料，是否真正解决了问题，还有哪些疑问，并分享您解决问题的经验。
6、未尽事宜，以后再补!
提醒：在求助HPLC技术问题之前，请各位先搜一下本版的旧帖整理帖或以前的HPLC技术问题专贴，看是否有战友求助过，这样也节省了您的时间，同时也使我们的资源得到充分利用!谢谢合作!
检测器用了多长时间了?建议你看一下氘灯是不是快没能量了?很有可能!
我现在用的岛津ＬＣ-１０ＡＴvp
怎么清洗混合器啊,我用乙晴的压力很大
请教怎么处理
还有有时候手动进样的时候,电脑和仪器连不上
没有Waiting for trigger的字样
不知道是怎么回事
谢谢
首先你能肯定是混合器的问题吗？如果是，可有两种办法清洗：
1 将柱子卸下，系统短接，根据你使用的流动相情况，逐步洗至水相，再用5%稀硝酸冲洗，用水、异丙醇洗，将其洗净，并转换至你的流动相体系。
2 将混合器与其他部件分开，用注射器冲洗。
我尝试过了
但是效果一般
请问怎么用注射器冲洗
我正在做头孢噻吩钠的含量测定，药典规定流动相是醋酸溶液－乙睛（3：1），可是出的峰型非常难看，拖尾非常厉害，开始以为是柱效不行，但是做别的好得很，请哪位高手指教应如何改进，不想参照英国药典！应为那样将要做大量验证工作！谢谢，急盼
我认为应该是柱效不行。当柱子用过一段时间后，柱效会有一定下降。但不会对所有物质都有明显效应。
你说的做别的好得很，是不是所用流动相不一样？也会出现这种现象。
你所用的流动相是醋酸溶液－乙睛（3：1），他所要求的柱子的柱效要非常好！柱子最好耐水性强，这样就会分离很好。
我建议你用一根好的柱子，耐水性强的，进口的柱子试试，我估计就可以了。
我想请教一下衍生和不衍生在做高效液相时有什么区别，因为有些物质不用衍生用高效液相也能做出来，那为什么还要用衍生这种方法呢？谢谢！
我想请教安捷仑1100色谱仪B泵的泵头压力(PURGR压力)比A泵的高30BAR(使用用一溶剂情况下),咋回事?
衍生主要是解决被测物检测灵敏度低、物质本身不稳定而无法检测等问题进行的，如氨基酸，大部分不带紫外吸收基团，一般就采用衍生法将其转化为带有紫外吸收或荧光吸收的物质再进行分析。
有些物质如果衍生和不衍生都能进行，而你又不要求检测的灵敏度，只是进行简单的分离，那当然可选择不衍生，因为衍生相对而言步骤比较繁琐。
回应： 我想请教一下衍生和不衍生在做高效液相时有什么区别，因为有些物质不用衍生用高效液相也能做出来，那为什么还要用衍生这种方法呢？谢谢！
紫外衍生化是指将无紫外吸收或吸收很弱的物质与带有紫外吸收集团的衍生化试剂进行反应，产生可用于紫外检测的化合物。衍生化通常分为柱前衍生化和柱后衍生化，相对而言，柱后衍生化应用更广泛。通过衍生化能显著提高检测灵敏度和选择性。柱后可见光衍生化检测经常用于过渡金属离子的分析，将过渡金属离子柱流出物与显色剂反应，生成有色配合物后，在可见光波长下检测。
做高液要不要衍生，要看具体情况而定，一般来说如果不需衍生就能测定，而且灵敏度不是很差，就不必使用衍生化，毕竟衍生化是比较烦琐的。目前使用柱前衍生化的都是迫不得已才采用的。
回应：我想请教安捷仑1100色谱仪B泵的泵头压力(PURGR压力)比A泵的高30BAR(使用用一溶剂情况下),咋回事?
你可以检查一下A、B各流路的管道、泵或者滤头等是否有堵塞的问题，也许是某个地方脏了。如果没有堵塞的话，你可以把泵阀逆时针拧松，然后用溶剂以5ml\min冲5分钟然后再调回来试试。
回应：我正在做头孢噻吩钠的含量测定，药典规定流动相是醋酸溶液－乙睛（3：1），可是出的峰型非常难看，拖尾非常厉害，开始以为是柱效不行，但是做别的好得很，请哪位高手指教应如何改进，不想参照英国药典！应为那样将要做大量验证工作！谢谢，急盼
我想一个可能的原因是不是你样品中药物的浓度太高了，信号溢出了，另外，如果各个浓度都一样，又不想换柱子可以试试加点三乙胺什么的，把你的流动相组分调整一下，当然要查一下资料。我也遇到过类似情况，当然柱子的柱效也是一方面的原因了，
请教：1、流动相的保存期限一般为多少？如果是甲醇：四氢呋喃：乙腈：水/30：10：30：30可以保存多少时间？如果含缓冲盐的可以保存多少天？保存期限与缓冲盐的浓度有关系吗？听别人说用缓冲盐只能用3天，是为了防止长菌还是析出盐呢？ 3 1 2 3 下一页 尾页
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同时，也非常感谢那些曾经在“色谱技术实践问答区”积极讨论的战友。
希望我们的新战友向他们学习，积极参与HPLC实践技术的讨论。
本规则根据天舒主任起草的药品标准SOS专帖改编而成，如有好的建议，请跟贴说明或pm我，谢谢！
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1、本帖只是药品、食品的HPLC技术问题求助帖，与HPLC技术问题无关的帖请勿在此求助!
2、求助者发帖前请先搜索一下你所求助的HPLC技术问题是否已经有战友求助过，若没有求助过，再发帖求助。
3、求助者发帖请尽量按照如下格式发帖求助：
[药品名称]：
[色谱条件]：
[色谱图]：
4、应助不限于格式与方式，直接帖出也可，附件也可，传真E-mail也可，但要尽可能表达清楚您的意思!
5、求助者得到帮助后最好跟帖说明一下，您根据应助者提供的资料，是否真正解决了问题，还有哪些疑问，并分享您解决问题的经验。
6、未尽事宜，以后再补!
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谢谢
首先你能肯定是混合器的问题吗？如果是，可有两种办法清洗：
1 将柱子卸下，系统短接，根据你使用的流动相情况，逐步洗至水相，再用5%稀硝酸冲洗，用水、异丙醇洗，将其洗净，并转换至你的流动相体系。
2 将混合器与其他部件分开，用注射器冲洗。
我尝试过了
但是效果一般
请问怎么用注射器冲洗
我正在做头孢噻吩钠的含量测定，药典规定流动相是醋酸溶液－乙睛（3：1），可是出的峰型非常难看，拖尾非常厉害，开始以为是柱效不行，但是做别的好得很，请哪位高手指教应如何改进，不想参照英国药典！应为那样将要做大量验证工作！谢谢，急盼
我认为应该是柱效不行。当柱子用过一段时间后，柱效会有一定下降。但不会对所有物质都有明显效应。
你说的做别的好得很，是不是所用流动相不一样？也会出现这种现象。
你所用的流动相是醋酸溶液－乙睛（3：1），他所要求的柱子的柱效要非常好！柱子最好耐水性强，这样就会分离很好。
我建议你用一根好的柱子，耐水性强的，进口的柱子试试，我估计就可以了。
我想请教一下衍生和不衍生在做高效液相时有什么区别，因为有些物质不用衍生用高效液相也能做出来，那为什么还要用衍生这种方法呢？谢谢！
我想请教安捷仑1100色谱仪B泵的泵头压力(PURGR压力)比A泵的高30BAR(使用用一溶剂情况下),咋回事?
衍生主要是解决被测物检测灵敏度低、物质本身不稳定而无法检测等问题进行的，如氨基酸，大部分不带紫外吸收基团，一般就采用衍生法将其转化为带有紫外吸收或荧光吸收的物质再进行分析。
有些物质如果衍生和不衍生都能进行，而你又不要求检测的灵敏度，只是进行简单的分离，那当然可选择不衍生，因为衍生相对而言步骤比较繁琐。
回应： 我想请教一下衍生和不衍生在做高效液相时有什么区别，因为有些物质不用衍生用高效液相也能做出来，那为什么还要用衍生这种方法呢？谢谢！
紫外衍生化是指将无紫外吸收或吸收很弱的物质与带有紫外吸收集团的衍生化试剂进行反应，产生可用于紫外检测的化合物。衍生化通常分为柱前衍生化和柱后衍生化，相对而言，柱后衍生化应用更广泛。通过衍生化能显著提高检测灵敏度和选择性。柱后可见光衍生化检测经常用于过渡金属离子的分析，将过渡金属离子柱流出物与显色剂反应，生成有色配合物后，在可见光波长下检测。
做高液要不要衍生，要看具体情况而定，一般来说如果不需衍生就能测定，而且灵敏度不是很差，就不必使用衍生化，毕竟衍生化是比较烦琐的。目前使用柱前衍生化的都是迫不得已才采用的。
回应：我想请教安捷仑1100色谱仪B泵的泵头压力(PURGR压力)比A泵的高30BAR(使用用一溶剂情况下),咋回事?
你可以检查一下A、B各流路的管道、泵或者滤头等是否有堵塞的问题，也许是某个地方脏了。如果没有堵塞的话，你可以把泵阀逆时针拧松，然后用溶剂以5ml\min冲5分钟然后再调回来试试。
回应：我正在做头孢噻吩钠的含量测定，药典规定流动相是醋酸溶液－乙睛（3：1），可是出的峰型非常难看，拖尾非常厉害，开始以为是柱效不行，但是做别的好得很，请哪位高手指教应如何改进，不想参照英国药典！应为那样将要做大量验证工作！谢谢，急盼
我想一个可能的原因是不是你样品中药物的浓度太高了，信号溢出了，另外，如果各个浓度都一样，又不想换柱子可以试试加点三乙胺什么的，把你的流动相组分调整一下，当然要查一下资料。我也遇到过类似情况，当然柱子的柱效也是一方面的原因了，
请教：1、流动相的保存期限一般为多少？如果是甲醇：四氢呋喃：乙腈：水/30：10：30：30可以保存多少时间？如果含缓冲盐的可以保存多少天？保存期限与缓冲盐的浓度有关系吗？听别人说用缓冲盐只能用3天，是为了防止长菌还是析出盐呢？ 3 1 2 3 下一页 尾页