请教大侠，在做标准曲线的时候最高和最低浓度是怎么确定的，对照品的浓度时怎么确定的，进液相的时候多高的峰多大的浓度最合适呢，对照品和样品峰面积差别多大最好呢？本人不是很懂的！
1.以中间浓度进行80%-120%至少选择5点进行标曲
2.一般有关物质1mg/ml,含量0.1mg/ml，当然还要根据实际样品进行调整
3.对于样品与对照品的峰面积，好像无硬性规定吧，一般不过载，不平头（有关物质除外），不分叉，不拖尾，不肩峰，分离良好，对称良好即可
4.含量测定时对照品浓度与样品浓度一致，至于峰面积，主要看样品的纯度了
5.杂质对照：以限度为标准
6.自身对照：有关物质浓度的1%或1.5%或2%等
杂质对照：以限度为标准
主要是怎么对照的，怎么配制浓度的，不是很懂的？
看看相关指导原则吧（CP,CDE,ICH,FDA,EP)，最基本的都不是很清楚
（1）含量标准曲线：
列如你的测试方法中规定样品溶液为0.2mg/ml，指导原则要求为80%至120%，即0.16mg/ml至0.24mg/ml。不过一般是把放宽为50%至150%，即0.10mg/ml至0.30mg/ml选5个浓度点做曲线。
（2）有关物质标准曲线：
列如你的测试方法中规定样品溶液为1.0mg/ml，杂质限度为单杂不得超过0.5%，指导导原则要求为80%至120%，0.004mg/ml（1.0mg/ml*0.5%*80%）至0.006mg/ml（1.0mg/ml*0.5%*120%）选5个浓度点做曲线。
你如果按照药典的方法你就上当了。因为药典的方法一致就是那个80%~120%。根本不考虑现在含量测定的要求在不断地进步。
你的标准曲线，是使用HPLC-ＤＡＤ做的吗？
你首先测定你的仪器最低定量限。也就是信噪比Ｓ/N 为10 的浓度点。一般就是1ppm左右。
你再测定5ppm，10ppm，25ppm，50ppm，100ppm，250ppm，500ppm，你测定了这些点以后，你就制作标准曲线。如果别人要六个点，就挑6个给她。
你样品中的峰面积可以通过稀释的方法落在这个范围内。你就放在中间就行了。
PS：稀释标准曲线的时候不要忘了使用初始流动相稀释哦。千万别用纯的甲醇。
还是给你具体方法好吧！给你大段概念的家伙都是外行，假专家。
以后少看药学的书，多看看环境分析的书和食品分析的文献法规。比药学好
我的提取物冻干粉是水溶性的，想测定在水中和甲苯、丙酮都能溶的相关物质，但是含量很低可能不到0.5%，现在也有自己的方法进液相，流动相是乙腈和水，应该对样品怎么前处理，是加水溶还是水和有机的混合物，还是纯有机溶剂，流动相和前处理的有机溶剂可不可不一样呢，还是必须相同的？还有样品浓度多大最好呢？自己不是很明白请大家帮助一下。
标准曲线我一般是把有关物质，含量，1%自身对照都包括进去，把有关物质和含量定在中间浓度，而且根据最小检测限配制低浓度，还有就是把杂质限量也要包括进去。不知道大家怎么做的
我觉得最大浓度和最小浓度要相差10倍左右
1.以中间浓度进行80%-120%至少选择5点进行标曲
2.一般有关物质1mg/ml,含量0.1mg/ml，当然还要根据实际样品进行调整
3.对于样品与对照品的峰面积，好像无硬性规定吧，一般不过载，不平头（有关物质除外），不分叉，不拖尾，不肩峰，分离良好，对称良好即可
4.含量测定时对照品浓度与样品浓度一致，至于峰面积，主要看样品的纯度了
5.杂质对照：以限度为标准
6.自身对照：有关物质浓度的1%或1.5%或2%等
杂质对照：以限度为标准
主要是怎么对照的，怎么配制浓度的，不是很懂的？
看看相关指导原则吧（CP,CDE,ICH,FDA,EP)，最基本的都不是很清楚
（1）含量标准曲线：
列如你的测试方法中规定样品溶液为0.2mg/ml，指导原则要求为80%至120%，即0.16mg/ml至0.24mg/ml。不过一般是把放宽为50%至150%，即0.10mg/ml至0.30mg/ml选5个浓度点做曲线。
（2）有关物质标准曲线：
列如你的测试方法中规定样品溶液为1.0mg/ml，杂质限度为单杂不得超过0.5%，指导导原则要求为80%至120%，0.004mg/ml（1.0mg/ml*0.5%*80%）至0.006mg/ml（1.0mg/ml*0.5%*120%）选5个浓度点做曲线。
你如果按照药典的方法你就上当了。因为药典的方法一致就是那个80%~120%。根本不考虑现在含量测定的要求在不断地进步。
你的标准曲线，是使用HPLC-ＤＡＤ做的吗？
你首先测定你的仪器最低定量限。也就是信噪比Ｓ/N 为10 的浓度点。一般就是1ppm左右。
你再测定5ppm，10ppm，25ppm，50ppm，100ppm，250ppm，500ppm，你测定了这些点以后，你就制作标准曲线。如果别人要六个点，就挑6个给她。
你样品中的峰面积可以通过稀释的方法落在这个范围内。你就放在中间就行了。
PS：稀释标准曲线的时候不要忘了使用初始流动相稀释哦。千万别用纯的甲醇。
还是给你具体方法好吧！给你大段概念的家伙都是外行，假专家。
以后少看药学的书，多看看环境分析的书和食品分析的文献法规。比药学好
我的提取物冻干粉是水溶性的，想测定在水中和甲苯、丙酮都能溶的相关物质，但是含量很低可能不到0.5%，现在也有自己的方法进液相，流动相是乙腈和水，应该对样品怎么前处理，是加水溶还是水和有机的混合物，还是纯有机溶剂，流动相和前处理的有机溶剂可不可不一样呢，还是必须相同的？还有样品浓度多大最好呢？自己不是很明白请大家帮助一下。
标准曲线我一般是把有关物质，含量，1%自身对照都包括进去，把有关物质和含量定在中间浓度，而且根据最小检测限配制低浓度，还有就是把杂质限量也要包括进去。不知道大家怎么做的
我觉得最大浓度和最小浓度要相差10倍左右