我现在在做一个表达外源蛋白的重组大肠杆菌菌株,蛋白是做药的。现在想确定大肠杆菌稳定表达蛋白的代次,但我不知道如何确定它的代次,过夜算一代?还是12h?20min?药物申报时有没有标准的时间要求?本人刚入行,很多东西不了解,请大家多帮助,!
大肠杆菌的代时(generation time)是多长,您查了文献没
您培养细菌时,有没有诱导细菌进行同步性生长?
诱导同步生长后,您有没有评价过针对您的培养基和培养条件,大肠杆菌的实际代时?
而且,大肠杆菌,我认为是一个菌群的概念,你是E. coli,还是O157?还是其他的“大肠杆菌”?
真是惭愧,这方面文献我感觉都不知道从何查起,记得曾听说大肠杆菌20min就可传一代;
我用的是分子克隆常用表达菌株BL21(DE3),转入重组质粒后诱导有目标蛋白表达,就是在细菌OD600达到0.6时加入IPTG,没做过其他处理,应该是没有进行同步性生长?这个怎么做呀?还有那个实际代时的测定,我感觉多我的实验会很有用的,但也不知道怎么做。
我是分子生物学专业的,对微生物生长代谢的都不大懂,请您多帮忙了
网上查一查,应该有这方面的介绍
不行就去看看微生物方面的教科书
至少,周德庆的《微生物学教程》你应该看看的
好的,你
从理论上讲大肠杆菌是20分钟就可以分裂一次,认为是传一代,但是在培养物中是大肠杆菌群体,不可能同步生长,无法用这个时间来确定代数,而且在实际操作中没有办法实现。在生物药物的报批资料里,往往是认为将基因工程菌转接一次,就算作一代,这个时间可以是12h,也可以是24h,或者8h,具体要看你操作上的可行性。药品申报时还没有看到有确定的要求。
wljcpu关于生物药物报批的回答!
大肠杆菌的代时(generation time)是多长,您查了文献没
您培养细菌时,有没有诱导细菌进行同步性生长?
诱导同步生长后,您有没有评价过针对您的培养基和培养条件,大肠杆菌的实际代时?
而且,大肠杆菌,我认为是一个菌群的概念,你是E. coli,还是O157?还是其他的“大肠杆菌”?
真是惭愧,这方面文献我感觉都不知道从何查起,记得曾听说大肠杆菌20min就可传一代;
我用的是分子克隆常用表达菌株BL21(DE3),转入重组质粒后诱导有目标蛋白表达,就是在细菌OD600达到0.6时加入IPTG,没做过其他处理,应该是没有进行同步性生长?这个怎么做呀?还有那个实际代时的测定,我感觉多我的实验会很有用的,但也不知道怎么做。
我是分子生物学专业的,对微生物生长代谢的都不大懂,请您多帮忙了
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不行就去看看微生物方面的教科书
至少,周德庆的《微生物学教程》你应该看看的
好的,你
从理论上讲大肠杆菌是20分钟就可以分裂一次,认为是传一代,但是在培养物中是大肠杆菌群体,不可能同步生长,无法用这个时间来确定代数,而且在实际操作中没有办法实现。在生物药物的报批资料里,往往是认为将基因工程菌转接一次,就算作一代,这个时间可以是12h,也可以是24h,或者8h,具体要看你操作上的可行性。药品申报时还没有看到有确定的要求。
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