1、概述
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种传染性肝脏疾病，具有传染性强，发病率较高，起病缓慢，容易复发、慢性化等特点。临床上按乙肝病毒感染程度分为无症状携带者、急性、慢性、重型肝炎；按病理学分为急性、轻度、中度、重度慢性肝炎、重型肝炎、肝硬化。治疗乙型肝炎中药制剂的药效学通常从抗乙肝病毒、保肝降酶、调节免疫功能、利胆退黄等药理作用方面来评价。不同类型的乙肝，中药治疗的侧重点不一样，在药效学试验设计时应根据药物特点和临床定位，合理选择实验方法，充分反映药物的药理作用，为临床研究提供依据。
现针对目前申报资料中此类药物药效学评价的常见问题及个人的认识进行归纳分析如下：
2、 药效学试验设计及注意问题
2.1 抗乙型肝炎病毒试验
若功能主治涉及抗病毒作用，药效学实验设计应进行抗病毒方面研究，而功能主治定位为保肝降酶，此项实验研究可以作为选做。抗乙型肝炎病毒试验一般包括体内、体外试验。由于受国内试验条件和动物模型的限制，目前申报资料中抗病毒试验基本采用鸭肝炎病毒（DHBV）动物模型和2.2.15细胞株体外培养方法。
在进行鸭肝炎病毒（DHBV）动物模型实验设计时，应合理选择鸭种、鸭龄、DHBV接种途径及DHBV接种量。血清中DHBV-DNA水平的定量检测在试验中地位很重要,应合理选择检测方法，一般常选用32P标记DHBV -DNA探针进行斑点杂交及放射自显影方法，计算血清DHBV-DNA密度，比较各用药组DNA抑制率，其他公认的DNA检测方法可以借鉴。同时应考虑以下几方面：第一，鸭感染DHBV后，除血清中与乙肝病毒相关指标有改变外，鸭肝脏也出现典型病变，试验中可以通过肝组织病理学检查，全面评价受试药的抗病毒作用。目前多数申报资料未提供肝脏组织病理学检查结果。第二，鸭感染DHBV后应进行DHBV感染成功的验证。因为影响鸭感染DHBV的因素较多，试验中各组鸭数量有限，应排除治疗前鸭感染DHBV个体差异，只有在模型成功的基础上进行试验得出结论才有说服力。第三，鸭肝组织DHBV-DNA水平在整个持续感染期间相对稳定，检测肝组织DHBV-DNA水平也能够显示乙肝病毒的感染状态，试验时应同时检测肝组织和血清中DHBV-DNA水平。
在2.2.15细胞株体外培养方法实验设计时，应设细胞对照及阳性药对照，并选择已上市且公认的抗乙肝病毒药物为阳性对照药物，阳性对照药物可以是中药也可以是化学药。体外试验应至少重复三批。中药制剂尤其是复方制剂成份复杂，影响体外试验的干扰因素较多，结果只提示药物对乙肝病毒的抑制程度，并不能全面反映受试物的抗乙肝病毒作用，但对于无临床应用基础的有效成分或有效部位及其组成的中药复方制剂，体外抗病毒试验对于该类受试药物抗乙肝病毒临床前有效性的评价起一定的指导作用。
抗乙型肝炎病毒的实验模型除上述两种以外，还有不少模型可以用于药效学评价，如土拨鼠肝炎模型、树鼩乙型肝炎病毒模型，但由于试验动物来源的限制，目前在新药抗乙型肝炎评价中未能推广应用，但可作为参考或深入研究内容。
2.2 保肝降酶试验
保肝降酶是中药制剂治疗乙肝重要药理作用之一，抗乙肝中药制剂的药效学实验设计时一般都选择此项实验进行评价。肝损伤模型一般有药物引起肝损伤和免疫性肝损伤。实验动物可选用大鼠、小鼠、兔、狗、豚鼠等。常用肝损伤药物有四氯化碳、醋氨酚（扑热息痛）、硫代乙酰胺、黄曲霉素、酒精、乙硫氨酸、D-半乳糖胺等。检测指标为血清中ALT、AST、TP、ALB、ALP、LDH、GGT、TBIL等含量和肝组织病理学检查，根据血清学指标的改变和肝脏病理损伤改善程度来评价药物的保肝降酶作用。免疫性肝损伤在病理生理机制上更接近人体乙型肝炎，采用该模型来评价药物的保肝降酶作用更具临床实际意义。免疫性肝炎一般采用卡介苗加脂多糖(LPS)诱发免疫性肝炎、免疫性肝纤维化、迟发性免疫性肝炎模型，评价指标与药物肝损伤模型相同。药效学实验设计时应综合考虑拟用的乙肝类型和药物特点，合理设计。
选择检测指标时应考虑以下几方面：第一，血清酶学，急性肝损伤血清ALT升高，慢性肝炎ALT可持续或反复增高,但对于重型肝炎黄疸加深，肝细胞大量坏死时，ALT反而下降；AST的意义与ALT相同,但特异性较ALT低。慢性活动性肝炎GGT往往显著升高。LDH的临床意义与ALT和AST大体一致。第二，血清蛋白，肝脏损害时，血清ALB浓度降低。慢性肝病时,免疫系统受刺激产生大量免疫球蛋白而导致血清GLB浓度上升。临床上A/G比值的检测有助于慢性肝炎活动和肝硬化的诊断。第三，血清胆红素，黄疸型肝炎时,血清直接和间接胆红素均增高。血清胆红素增高常与肝细胞坏死程度相关。第四，凝血酶原时间（PT），凝血酶原主要由肝脏合成，肝病时PT长短与肝脏损害程度成正比。此外，上述指标改变所代表的肝细胞损伤情况有所不同，ALB、TP、PT等改变反映肝实质细胞内织网蛋白生物合成功能；ALT、AST、ALP、GGT、LDH反映肝实质细胞膜通透性病变；肝细胞O2-，OH-、MDA、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽反映肝细胞、线粒体、微粒体及其生物膜病变。
目前的申报资料中，急性肝损伤模型一般选择检测指标为AST、ALT，部分申报资料中增加了TP、ALB的检测，有些申报资料在评价结果时不考虑临床实际意义，只注重正常对照组与模型组、模型组与给药组之间各指标的统计学差异，忽略生物学意义。因此在试验设计时应根据受试物的特点选择合理的检测指标，并对结果进行客观、合理的分析。急性肝损伤模型动物肝脏病理改变虽没有慢性肝损伤明显，但部分动物模型中同样出现肝脏脂肪变性、坏死等，因此实验中应关注动物肝脏病理改变情况。与急性肝损伤模型试验相比，申报资料中慢性肝损伤和肝纤维化试验中检测指标数目相对较全面，除检测反映肝功能的血清酶学指标外，对评价肝纤维化有价值的指标如胶原蛋白、羟脯氨酸、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽、丙二醛、透明质酸等也进行了检测，同时对肝脏进行组织病理学检查，并进行病变等级评分。
2.3 免疫调节作用
随着对乙肝与机体免疫失调关系的深入研究，中药制剂从免疫调节方面来治疗乙肝显示出一定的优势。在受试物的免疫调节实验设计时，应根据处方组成特点和临床定位，合理选择实验方法，综合评价受试物对免疫功能的影响。相对保肝降酶药理作用研究，目前申报资料中对改善免疫功能的研究相对简单。
肝细胞内HBV要靠具有特异性免疫活性的T细胞对感染的肝细胞进行杀伤才能杀灭，体液中HBV要靠B细胞产生的特异性抗体加以中和，并被巨噬细胞消化杀灭，消除HBV需细胞免疫与体液免疫协同。对免疫系统影响试验目前所进行最多为单核巨噬细胞功能（小鼠碳粒廓清法）和腹腔吞噬巨噬细胞功能（小鼠鸡红细胞吞噬法）、T淋巴细胞转化试验及血清溶血素的测定、脾脏T、B淋巴细胞增殖作用的影响等等。因这些试验是经典实验且容易进行，但所反映的受试物对免疫功能影响的信息有限，实验设计时除了选择上述方法外，应考虑采用新的技术和方法进行受试物对免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群、细胞因子以及其他免疫功能相关的研究。
2.4 利胆退黄作用
对于急性黄疸型乙型肝炎和慢性乙型肝炎合并肝内胆汁淤积，进行利胆退黄治疗显得很重要，通过消除胆汁郁积，加速黄疸代谢，有效防止向肝纤维化转化。受试药物拟用于上述病症，药效学实验设计应进行药物的利胆退黄作用研究。实验方法可选用药物对正常或胆汁淤积动物的胆汁分泌的影响，也可以用异硫氰酸苯酯造成胆汁淤滞性黄疸模型来评价。
3、合理设计药效学试验方案
药效学试验设计的基础是拟定的功能主治内容，药效学试验结果为临床研究提供试验依据。中药治疗乙肝作用缓慢但持久，并以人的整体调节为主，根据乙肝的不同分型，各期的病理特点（炎症活动和损伤程度）差异，治疗侧重点不同，如治疗急性乙肝药物以退黄、降酶、保肝、提高机体免疫力为主；治疗慢性乙肝药物以保护肝脏功能,降低转氨酶,抑制病毒复制，提高机体免疫能力为主。药效学试验设计时应明确受试药物适应症的定位，申报的功能主治涉及抗乙肝病毒方面内容，药效学研究资料应提供支持抗乙肝病毒研究；申报的功能主治为改善急、慢性乙型肝炎患者的肝功能，主要药效学应包括对急、慢性肝损伤的保肝降酶作用以及免疫调节等；申报的功能主治为慢性肝炎及肝硬化的药物，应作慢性肝损伤实验。
中药制剂无论是单味还是复方，均含有多种成分，这些成分的作用并非简单的叠加，而是多作用途径、多靶点发挥作用。因此不能机械地套用化学药品的药效评价方法来评价中药，而应根据处方特点和临床定位来选择合适的试验方法和指标。药效学试验设计全面合理，从中获取的受试物治疗乙肝的药理作用信息就全面，为临床研究提供的依据越充分，临床试验研究就有针对性，这也是抗乙肝中药临床前药效学试验的最终目的。
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种传染性肝脏疾病，具有传染性强，发病率较高，起病缓慢，容易复发、慢性化等特点。临床上按乙肝病毒感染程度分为无症状携带者、急性、慢性、重型肝炎；按病理学分为急性、轻度、中度、重度慢性肝炎、重型肝炎、肝硬化。治疗乙型肝炎中药制剂的药效学通常从抗乙肝病毒、保肝降酶、调节免疫功能、利胆退黄等药理作用方面来评价。不同类型的乙肝，中药治疗的侧重点不一样，在药效学试验设计时应根据药物特点和临床定位，合理选择实验方法，充分反映药物的药理作用，为临床研究提供依据。
现针对目前申报资料中此类药物药效学评价的常见问题及个人的认识进行归纳分析如下：
2、 药效学试验设计及注意问题
2.1 抗乙型肝炎病毒试验
若功能主治涉及抗病毒作用，药效学实验设计应进行抗病毒方面研究，而功能主治定位为保肝降酶，此项实验研究可以作为选做。抗乙型肝炎病毒试验一般包括体内、体外试验。由于受国内试验条件和动物模型的限制，目前申报资料中抗病毒试验基本采用鸭肝炎病毒（DHBV）动物模型和2.2.15细胞株体外培养方法。
在进行鸭肝炎病毒（DHBV）动物模型实验设计时，应合理选择鸭种、鸭龄、DHBV接种途径及DHBV接种量。血清中DHBV-DNA水平的定量检测在试验中地位很重要,应合理选择检测方法，一般常选用32P标记DHBV -DNA探针进行斑点杂交及放射自显影方法，计算血清DHBV-DNA密度，比较各用药组DNA抑制率，其他公认的DNA检测方法可以借鉴。同时应考虑以下几方面：第一，鸭感染DHBV后，除血清中与乙肝病毒相关指标有改变外，鸭肝脏也出现典型病变，试验中可以通过肝组织病理学检查，全面评价受试药的抗病毒作用。目前多数申报资料未提供肝脏组织病理学检查结果。第二，鸭感染DHBV后应进行DHBV感染成功的验证。因为影响鸭感染DHBV的因素较多，试验中各组鸭数量有限，应排除治疗前鸭感染DHBV个体差异，只有在模型成功的基础上进行试验得出结论才有说服力。第三，鸭肝组织DHBV-DNA水平在整个持续感染期间相对稳定，检测肝组织DHBV-DNA水平也能够显示乙肝病毒的感染状态，试验时应同时检测肝组织和血清中DHBV-DNA水平。
在2.2.15细胞株体外培养方法实验设计时，应设细胞对照及阳性药对照，并选择已上市且公认的抗乙肝病毒药物为阳性对照药物，阳性对照药物可以是中药也可以是化学药。体外试验应至少重复三批。中药制剂尤其是复方制剂成份复杂，影响体外试验的干扰因素较多，结果只提示药物对乙肝病毒的抑制程度，并不能全面反映受试物的抗乙肝病毒作用，但对于无临床应用基础的有效成分或有效部位及其组成的中药复方制剂，体外抗病毒试验对于该类受试药物抗乙肝病毒临床前有效性的评价起一定的指导作用。
抗乙型肝炎病毒的实验模型除上述两种以外，还有不少模型可以用于药效学评价，如土拨鼠肝炎模型、树鼩乙型肝炎病毒模型，但由于试验动物来源的限制，目前在新药抗乙型肝炎评价中未能推广应用，但可作为参考或深入研究内容。
2.2 保肝降酶试验
保肝降酶是中药制剂治疗乙肝重要药理作用之一，抗乙肝中药制剂的药效学实验设计时一般都选择此项实验进行评价。肝损伤模型一般有药物引起肝损伤和免疫性肝损伤。实验动物可选用大鼠、小鼠、兔、狗、豚鼠等。常用肝损伤药物有四氯化碳、醋氨酚（扑热息痛）、硫代乙酰胺、黄曲霉素、酒精、乙硫氨酸、D-半乳糖胺等。检测指标为血清中ALT、AST、TP、ALB、ALP、LDH、GGT、TBIL等含量和肝组织病理学检查，根据血清学指标的改变和肝脏病理损伤改善程度来评价药物的保肝降酶作用。免疫性肝损伤在病理生理机制上更接近人体乙型肝炎，采用该模型来评价药物的保肝降酶作用更具临床实际意义。免疫性肝炎一般采用卡介苗加脂多糖(LPS)诱发免疫性肝炎、免疫性肝纤维化、迟发性免疫性肝炎模型，评价指标与药物肝损伤模型相同。药效学实验设计时应综合考虑拟用的乙肝类型和药物特点，合理设计。
选择检测指标时应考虑以下几方面：第一，血清酶学，急性肝损伤血清ALT升高，慢性肝炎ALT可持续或反复增高,但对于重型肝炎黄疸加深，肝细胞大量坏死时，ALT反而下降；AST的意义与ALT相同,但特异性较ALT低。慢性活动性肝炎GGT往往显著升高。LDH的临床意义与ALT和AST大体一致。第二，血清蛋白，肝脏损害时，血清ALB浓度降低。慢性肝病时,免疫系统受刺激产生大量免疫球蛋白而导致血清GLB浓度上升。临床上A/G比值的检测有助于慢性肝炎活动和肝硬化的诊断。第三，血清胆红素，黄疸型肝炎时,血清直接和间接胆红素均增高。血清胆红素增高常与肝细胞坏死程度相关。第四，凝血酶原时间（PT），凝血酶原主要由肝脏合成，肝病时PT长短与肝脏损害程度成正比。此外，上述指标改变所代表的肝细胞损伤情况有所不同，ALB、TP、PT等改变反映肝实质细胞内织网蛋白生物合成功能；ALT、AST、ALP、GGT、LDH反映肝实质细胞膜通透性病变；肝细胞O2-，OH-、MDA、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽反映肝细胞、线粒体、微粒体及其生物膜病变。
目前的申报资料中，急性肝损伤模型一般选择检测指标为AST、ALT，部分申报资料中增加了TP、ALB的检测，有些申报资料在评价结果时不考虑临床实际意义，只注重正常对照组与模型组、模型组与给药组之间各指标的统计学差异，忽略生物学意义。因此在试验设计时应根据受试物的特点选择合理的检测指标，并对结果进行客观、合理的分析。急性肝损伤模型动物肝脏病理改变虽没有慢性肝损伤明显，但部分动物模型中同样出现肝脏脂肪变性、坏死等，因此实验中应关注动物肝脏病理改变情况。与急性肝损伤模型试验相比，申报资料中慢性肝损伤和肝纤维化试验中检测指标数目相对较全面，除检测反映肝功能的血清酶学指标外，对评价肝纤维化有价值的指标如胶原蛋白、羟脯氨酸、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽、丙二醛、透明质酸等也进行了检测，同时对肝脏进行组织病理学检查，并进行病变等级评分。
2.3 免疫调节作用
随着对乙肝与机体免疫失调关系的深入研究，中药制剂从免疫调节方面来治疗乙肝显示出一定的优势。在受试物的免疫调节实验设计时，应根据处方组成特点和临床定位，合理选择实验方法，综合评价受试物对免疫功能的影响。相对保肝降酶药理作用研究，目前申报资料中对改善免疫功能的研究相对简单。
肝细胞内HBV要靠具有特异性免疫活性的T细胞对感染的肝细胞进行杀伤才能杀灭，体液中HBV要靠B细胞产生的特异性抗体加以中和，并被巨噬细胞消化杀灭，消除HBV需细胞免疫与体液免疫协同。对免疫系统影响试验目前所进行最多为单核巨噬细胞功能（小鼠碳粒廓清法）和腹腔吞噬巨噬细胞功能（小鼠鸡红细胞吞噬法）、T淋巴细胞转化试验及血清溶血素的测定、脾脏T、B淋巴细胞增殖作用的影响等等。因这些试验是经典实验且容易进行，但所反映的受试物对免疫功能影响的信息有限，实验设计时除了选择上述方法外，应考虑采用新的技术和方法进行受试物对免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群、细胞因子以及其他免疫功能相关的研究。
2.4 利胆退黄作用
对于急性黄疸型乙型肝炎和慢性乙型肝炎合并肝内胆汁淤积，进行利胆退黄治疗显得很重要，通过消除胆汁郁积，加速黄疸代谢，有效防止向肝纤维化转化。受试药物拟用于上述病症，药效学实验设计应进行药物的利胆退黄作用研究。实验方法可选用药物对正常或胆汁淤积动物的胆汁分泌的影响，也可以用异硫氰酸苯酯造成胆汁淤滞性黄疸模型来评价。
3、合理设计药效学试验方案
药效学试验设计的基础是拟定的功能主治内容，药效学试验结果为临床研究提供试验依据。中药治疗乙肝作用缓慢但持久，并以人的整体调节为主，根据乙肝的不同分型，各期的病理特点（炎症活动和损伤程度）差异，治疗侧重点不同，如治疗急性乙肝药物以退黄、降酶、保肝、提高机体免疫力为主；治疗慢性乙肝药物以保护肝脏功能,降低转氨酶,抑制病毒复制，提高机体免疫能力为主。药效学试验设计时应明确受试药物适应症的定位，申报的功能主治涉及抗乙肝病毒方面内容，药效学研究资料应提供支持抗乙肝病毒研究；申报的功能主治为改善急、慢性乙型肝炎患者的肝功能，主要药效学应包括对急、慢性肝损伤的保肝降酶作用以及免疫调节等；申报的功能主治为慢性肝炎及肝硬化的药物，应作慢性肝损伤实验。
中药制剂无论是单味还是复方，均含有多种成分，这些成分的作用并非简单的叠加，而是多作用途径、多靶点发挥作用。因此不能机械地套用化学药品的药效评价方法来评价中药，而应根据处方特点和临床定位来选择合适的试验方法和指标。药效学试验设计全面合理，从中获取的受试物治疗乙肝的药理作用信息就全面，为临床研究提供的依据越充分，临床试验研究就有针对性，这也是抗乙肝中药临床前药效学试验的最终目的。