四、苷类化合物中常见糖的种类、结构和纸色谱鉴定法
苷中与甘愿连接的常见的单糖有:五碳醛糖(如D-琴糖、D-木糖、L-阿拉伯糖)、六碳醛糖(如D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖)、甲基五碳糖(如D-鸡纳糖、L-鼠李糖、D-夫糖)、六碳酮糖(如D-果糖)、糖醛酸(如D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸)等。与苷元连接的二糖常见的有:龙胆二糖、麦芽糖、冬绿糖、蚕豆糖、昆布二糖、槐糖、芸香糖、新橙皮糖等。
糖类的纸色谱常用水饱和的有机溶剂展开,其中以正丁醇-乙醇-水和饱和的苯酚两种溶剂系统应用最为普遍。糖类的纸色谱常用显色即有:硝酸银试剂、三苯四氮唑盐试剂、苯胺-邻苯二甲酸盐试剂、3,5二羟基甲苯-盐酸试剂、过碘酸加联苯胺试剂等。
五、结构鉴定
1.糖的种类和比例 一般是将其苷键全部水解,然后再用纸色谱或薄层色谱的方法检出糖的种类,经显色后用薄层扫描的方法测定出各糖之间的分子比。当然也可采用气相色谱或HPLC的方法对各单糖进行定性定量分析。
2.糖与苷元的连接位置 糖连接位置的测定多是将被测物全甲基化,然后水解所有的苷键,用气相色谱的方法对水解产物进行定性定量分析。通常具有游离羟基的部位即是糖的连接位点。目前多用苷化位移来确定。糖的端基羟基成苷后,端基碳(C1)和苷元的α-C的化学位移均向低场移动,而相邻的碳(β-C)稍向高场移动,偶尔也有稍向低场移动的,这种苷化前后的化学位移变化,称做苷化位移。
3.糖的连接顺序及位置 早期解决糖链连接顺序的方法主要是部分水解法,即稀酸水解、甲醇解、乙酰解、碱水解等方法,将糖链水解成较小的片段(各种低聚糖),然后根据水解所得的低聚糖推断整个糖链的结构;质谱分析是解决低聚糖及其苷中糖连接顺序的一个有力工具,在了解了糖的组成后,可根据质谱中的裂解规律和该化合物的裂解碎片推测低聚糖及其苷中糖链的连接顺序;现在测定糖链结构最常用的方法是NMR和2D-NMR法。
4.苷键的构型 苷键构型的确定方法有核磁共振法、酶解法、分子旋光差法(Klyne法)等,其中目前最常用的是核磁共振法。
(1)根据端基质子的偶合常数确定苷键的构型。
对绝大多数吡喃糖,当苷键为β-D型时,偶合常数为6~8Hz;当苷键为α-D时,偶合常数为2~4Hz。但甘露糖和鼠李糖无法用此方法确定它们的苷键构型。
(2)在吡喃糖中端基碳的碳氢偶合常数(1JC1-H1)也可用于确定苷键的构型。当偶合常数为170~175Hz左右时,为α-D或β-L型苷键;偶合常数为160~165Hz左右时,为β-D或α-L型苷键。
六、苦杏仁苷的主要理化性质和鉴别
苦杏仁是一种氰苷,易被酸和酶所催化水解。水解得到的苷元α-羟基苯已腈很不稳定,易分解成苯甲醛和氢氰酸。
鉴别苦杏仁时,可利用其水解产生的苯甲醛。苯甲醛具有特殊的香气,可使三硝基苯酚试纸显砖红色,以此鉴定苦杏仁苷的存在。