这几天一直在做hplc.但是每天的标准品保留时间都不一样，而且是越来越长。最短的和最长的能够相差将近20分钟，刚开始没有用柱温箱，今天用了，柱压明显降低，但是保留时间却比没有用柱温箱的时候延长了。流动相是一样的，进样量也是一样的，请问问题出在哪里啊。是不是色谱柱有问题了啊。

柱压在每一次都是一致的么？如果柱子不稳定，设一个梯度冲下柱子吧，最终冲洗比例是你流动相的比例，然后换上你的流动相。


今天的柱压都很稳定的，我用的是梯度洗脱，并且每次用完后，都用最初的流动相比例冲柱子，每次做完实验都按照说明书的要求做的。保留时间相差这么大很郁闷啊。

如果进样量、温度和其他参数都一样，而同一个样品的保留时间相差这么大，我觉得可能是色谱柱的问题，建议先等梯度跑标准品，调整流动相比例使得样品在10～20min之间出峰，然后重复进样5次，看看保留时间相差多少。如果还是很大的话，很可能是柱子的问题了，用异丙醇洗柱子吧，然后再试，要不换个柱子试试，也能找出来原因


你好，今天的柱压又有问题了，昨天用保温箱柱压一直在１００左右，而今天柱压却倒了１５０左右，难道真的是柱子有问题了啊，没有用柱温箱的时候柱压也是１５０左右。

难道不进样只用纯甲醇跑的时候柱压也不稳定？一般用纯甲醇跑柱压应该在90左右～如果是这样，我觉得不是色谱柱堵了就是HPLC中间的某个管路不通畅，先试试用异丙醇洗洗柱子吧


倒不是柱子污染的问题，因为保留时间每一针之间差别大，应该就是系统不稳定，那么柱子是一方面，另外，你的流动相体系，是否有混合的精准，在线混合泵是否运行良好

首先一个是流动相的准确性，有些物质对流动相比例要求很高，所谓差之毫厘，谬以千里，而且你是梯度洗脱，不知道你有没有使用缓冲盐？（我以前做过厄贝沙坦的方法摸索，有一个缓冲盐配得差一点，时间就差得离谱）
其次系统是否存在漏液现象，有漏液的话，保留时间相差也会千奇百怪的，这个峰面积会有所体现（如果进样用样品浓度一致的话）
第三，柱压，你这个柱压差得太离谱了，Agilent的柱压一般都很稳定的，岛津的波动可能大点，但是相差50，肯定是有系统原因的绝对不是偶然因素。
第四就是柱效了，有没有观察柱效啊，柱效有没有波动？

还有就是有没有柱残留，可以在检测后进空白样看看有无色谱峰

色谱柱选择不合适，对样品有强保留