如题,6升发酵液,使用大孔树脂吸附后,丙酮洗脱后,使用HPLC检测,找不到目标化合物了。该化合物极性比较小,哪位大侠能给个建议?
1、点个薄层或换个HPLC试试,看看是不是HPLC出毛病了;
2、大孔树脂可以产生死吸附,是不是因为你的量小,损失掉了。
3、你先做个预实验看看结果:试试用少量的发酵液(HPLC可以检测到目标成分)上一个小点的大孔树脂柱,先用醇洗脱一下,在用丙酮洗脱看看能否检测到。上述仅供参考
,对了,不知你用的那种大孔树脂,是弱极性的,中极性的还行强极性的,按你说目标分子极性较小,该选择非极性或弱极性较好,当然中极性的大孔树脂也可以。
HPLC没问题,收菌之前检测过样品,再进HPLC还能检测到产物,唯独树脂吸附后,丙酮洗脱后,基本找不到产物了。可能变了?
大孔树脂属于物理吸附,应该不会变。用的非极性还是中极性的大孔树脂?型号多少? 另外,换个洗脱剂试试(如70-90%的乙醇),是不是还没洗下来。
树脂名称为XAD-16...
建议洗脱的时候用TLC随时检验,如果没有,考虑样品中目标物量小,被树脂吸附,没有被洗脱
我们一般用HPLC检测的,根据UV及保留时间及亮度,检测目标产物的。
用水洗脱之后,就直接用丙酮洗脱目标物。。你们以前用过这种方法吗,可行吗。
如果没用过,我感觉由水直接过渡到丙酮,跨度太大。不如试试位于两者之间极性的洗脱剂,如如70-90%的乙醇。试试,看看怎么样。
另外,我们用过大孔树脂D101,用95%的乙醇去冲洗,一般可以将化合物全部洗下来。因此常在分离富集的最后一步使用
1、点个薄层或换个HPLC试试,看看是不是HPLC出毛病了;
2、大孔树脂可以产生死吸附,是不是因为你的量小,损失掉了。
3、你先做个预实验看看结果:试试用少量的发酵液(HPLC可以检测到目标成分)上一个小点的大孔树脂柱,先用醇洗脱一下,在用丙酮洗脱看看能否检测到。上述仅供参考
,对了,不知你用的那种大孔树脂,是弱极性的,中极性的还行强极性的,按你说目标分子极性较小,该选择非极性或弱极性较好,当然中极性的大孔树脂也可以。
HPLC没问题,收菌之前检测过样品,再进HPLC还能检测到产物,唯独树脂吸附后,丙酮洗脱后,基本找不到产物了。可能变了?
大孔树脂属于物理吸附,应该不会变。用的非极性还是中极性的大孔树脂?型号多少? 另外,换个洗脱剂试试(如70-90%的乙醇),是不是还没洗下来。
树脂名称为XAD-16...
建议洗脱的时候用TLC随时检验,如果没有,考虑样品中目标物量小,被树脂吸附,没有被洗脱
我们一般用HPLC检测的,根据UV及保留时间及亮度,检测目标产物的。
用水洗脱之后,就直接用丙酮洗脱目标物。。你们以前用过这种方法吗,可行吗。
如果没用过,我感觉由水直接过渡到丙酮,跨度太大。不如试试位于两者之间极性的洗脱剂,如如70-90%的乙醇。试试,看看怎么样。
另外,我们用过大孔树脂D101,用95%的乙醇去冲洗,一般可以将化合物全部洗下来。因此常在分离富集的最后一步使用