梯度过柱洗脱，如果梯度变化过大会有什么影响？是有气泡吗？

换梯度时，要特意留一些上一梯度的溶剂在柱子上端。将下一个梯度的溶剂装在分液漏斗中（漏斗上端密闭，下端打开），放在柱子上面，这样柱子下端流出一滴，分液漏斗就会补充一滴，既可以控制柱子中溶剂的高度不变，从而使柱流速稳定；又可以使分液漏斗中流出的每一滴溶剂都被下面的溶剂稀释，从而完成两个梯度间的平稳过渡。
我认为这样做有三个好处：
1 省事。免得在旁边看着小心别让柱子流干。
2 减少产生气泡的危险，特别是梯度比较大时，这招很管用。不过下个梯度要稍微多冲些时间才能平衡。有人说20％的浓度差是比较安全的。用此法，我曾经成功地将20％的甲醇－水溶液直接换到100％的甲醇，而柱子安然无恙。
3 上个梯度溶剂被下个梯度溶剂慢慢稀释，使梯度的变化不致过于激烈，起到缓冲作用，效果有点像线性连续梯度，岂不是很好。

如果梯度变化过大，那么极性变化就很大，下一个极性的成分会分不开，一起下来。


牛

梯度过大会使后面的成分一起洗脱下来，一般极性溶剂的比例增加在5-10%，每次洗脱3-5个柱体积。


柱子跑得太有技术含量了

最好不要变化太大，可以慢慢改变梯度来洗脱嘛，而且变化大了，很有可能会产生气泡

一个梯度用多少洗脱剂，我从未算过，一般我一直洗到没有东西再换另一梯度，前一个洗脱剂当流到和柱高（我的是硅胶+样品+硅胶+棉花的高度）一致时，我直接加下一个梯度的洗脱剂，会不会有气泡，没考虑那么多，不过我的还好，除了开始洗脱时会有一点气泡，排除完后，换洗脱剂也没发现气泡，一直都很好，我的是干法装柱

我前面说过了，可以按填料所占的柱子的体积算，如果粗分，想快一点，3个柱体积也行了，如果想分彻底一点，要5个柱体积，但分离好的前提是上样量不要超过2%，最好在1%


第三条说的很有Idea。我想问下，这个“线性梯度洗脱”听着是好，分的时候样品要是能做到类似梯度制备的话岂不更好（像HPLC那样），若是量大的话分时也会交叉，这个线性梯度听着很好，二楼有具体实践么？可否详解一二，觉得很好YE