求助：本人的实验室现在由于没有人用过反相硅胶，现在要分离苯乙醇苷类的物质，能否用过的告知下经验啊~~使用的方法，上样量，洗脱溶剂怎么选择，一般分段接的话多少体积的接一瓶啊~~还有 之前用正相硅胶板摸条件的时候，点就一个，而且还很大的一团，这是什么原因啊~~，本人很着急，试验就这么终止了，感谢雪中送炭~本人不胜感激

反相硅胶用的溶剂系统是甲醇水
起始把柱子替换成水，然后上样吸附，样品也要水溶解
然后用甲醇水梯度洗脱

1关于你说的反相硅胶柱用的应该不是中压色谱系统而是就用了个泵在跑，那么就没有紫外检测，可以选择跑柱同时点板检测，所以先判断你样品有没有颜色，如果有，在有颜色时接的瓶多一些。
2关于洗脱剂和梯度建议参考文献
3上样量一般比较纯的话上样量不大于 0.5g/120g 填料




我想请教下 我之前用的硅胶板点样摸条件时跑出来的物质分不开，就一个大团，那样怎么办啊？


另外 我想问下，我的样品的含量才57%，可以直接这样用反相吗？会不会对柱子不好啊？

我也最近想问这个，非得用水溶样吗？我用的是水不溶性化合物，怎么溶啊

最好用同类型的分析柱在色谱仪上跑一下，确定洗脱溶剂，上样量话和纯化目的以及在这种填料对样品分离度有关，如果你是粗分可以量大点，杂质和目标物分的很快也可以上的大点，总之纯化策略和正相硅胶是一样的，就是洗脱溶剂选择有所不同。样品溶解的话也和样品在填料上的保留有关系，也不一定非要用水溶解，只要保证在该溶剂强度下不被洗脱下来就可


我想问下啊 我现在上完样后，一开始冲柱子就有我要的成分冲下来了，怎么办啊？是不是我选择的极性不合适啊？还是我的样品不适合用反相分离~· 怎么考察下我该选择多大浓度的甲醇啊？麻烦了期待您的指点~~

可以买反相板子来摸索条件，不过个人认为没有必要，我过ODS时都是用少量甲醇溶解样品，起始看样品极性，不一定从水开始洗脱。可以20%甲醇等。

首先你要排除是不是上样速度太快或者是过载造成的，这个你可以加大甲醇比例，看有没有更多的目标物被洗下来。至于多大浓度不好说，要兼顾溶解度和能否被吸附的要求，你确定分析方法了吗？如果也用C18柱分析的话，就可以参考它的条件