最近在用一个琼脂糖凝胶，给多糖分级。因为以前没有做过，没什么经验，柱子装了一个星期都没有装好，总是上样的时候，顺着避流下来，就一条色带。
我的装柱过程是这样的：
先将凝胶抽干（买来时20%乙醇浸泡的），用大概凝胶：水=3：1的水溶胀2h，最后搅拌程糊状，湿法装柱，静置沉降一夜。第二天用蠕动泵低流速（低于2ml/min，柱直径2.6cm）平衡柱子5h左右。然后湿法上样
请大家帮们分析，分析问题出在哪，怎么解决?
了

这么快就沉了啊，顶到高手出现！

胶要先溶胀好，脱气后再装柱子，上样后成一条线是因为你柱子没装好，柱效不好，平衡的时候静水压就可以，最好平衡一夜


我用的是琼脂糖凝胶6FF，技术人员说这款凝胶不用溶胀的。买来就是20%乙醇浸泡的。是这么回事吗？ 我柱直径2.6，柱高大概35cm。静压流速大概0.5ml/min,特别慢，这正常吗？


一般所有的胶买来都是在20%乙醇保存的，你最好是在装柱子之前用你的流动相将乙醇置换出来，溶胀一下，以防止装柱子后再换流动相后胶会溶胀。像你说的这种柱子0.5的流速确实有点慢，你最好再重新装一下。还有一般多糖分级使用长点的柱子比较好（2.6*100cm）

在固定好的层析柱中加入约1/3体积的缓冲液，关闭柱出口，在柱顶部连续加入已经充分平衡好的琼脂糖凝胶（事先把凝胶调成流动性较好的糊状物），待凝胶沉降约3cm时打开出口，并连续加入糊状的凝胶，使其在形成的胶粒床面上连续均匀的沉降，直至凝胶完全沉降至适当的柱床体积为止。然后关闭出口，使上层有3cm高的缓冲液并在整个层析过程中一直维持，不能使柱子走空。为了防止柱床表面不会由于溶剂或样品的加入而引起搅动，要在柱床表面加一个保护装置，如圆形滤纸片或纱网等。

希望对你有帮助哈！

调糊也应注意。我是静置，倒出上清，加水摇起，静置倒出上清，几次后认为替换成水了。用胶体积与整体积的约为60%时，摇匀装柱较好，不浓也不希。