我最近在提取食用真菌的多糖,准备纯化后做结构。
遇到不少问题,由于以前课题组也没有人做过多糖,所以只能依靠咱们的同志帮忙了。
我首先用乙醇处理完样品,昨天用水煮了,但水提液用选择蒸发浓缩的时候,经常喷(60度,30转/min),而且水蒸发的速度特别慢。感觉水提液比较稠,颜色很深,发黑。会不会是果胶之类的影响,我打算用醇沉,但不浓缩的话,估计乙醇用量会非常大。
我今天打算把水提液直接放水浴锅里,慢慢煮,不知道这样行不行,会不会破坏多糖结构。
另外,我昨天水煮了3次之后,第四次就放在高压灭菌锅里,105度,0.04MP下处理了一个小时,不知道这样会不会破坏多糖,但测糖的量,还是蛮高的。
有同学做过多糖的 都是先醇提,然后浓缩,因为糖苷都很粘稠,蒸的时候比较困难,建议你用大一点的瓶子蒸少量多次!那样最好!
很多多糖在高温下是会降解的,之所以高温处理还能测得含量很高,是因为你测的是葡萄糖的量吧,多糖降解成单糖或寡糖,肯定还是能测出来的
多糖做结构提取的时候温度就不能过高,你用煮的,就不行了。
我70℃提的。
之后浓缩液没有出现你的情况。
提取温度高虽然提取较完全(以葡萄糖计),但是对大分子多糖的结构势必有影响的,你说呢?
多糖蛋白含量高的话就会喷。我也遇到过,你在旋转蒸发时压力不要太大,等快到最大压力时打开旋钮进气,稍微放一点气,如果压力迅速减少的话就再拧上,如此几次有时就会好转。将透气阀拧到某个位置正好达到想喷不喷的时候也可以的,这时候压力不是最大,但蒸发速度也是可以的。另外也可先把压力上去,温度先调到20度,旋转一会后慢慢上调几度,逐渐上升到60度,这样也会防止喷的。
大家的帮助,另外我想知道,我这样用沸水浴浓缩的话,糖链会断裂到什么程度,仅仅是多糖聚合度下降吗,还是大部分降解成单糖了。
不会断裂很多的,只是少部分断裂了。你可以测定分子量试试看。大部分还是好的
不同的糖性质不同,有的多糖遇热高温就会断链,因此你最好查一下相关性质,再做工艺决定,另外就算多糖被破坏了成为单糖也会被测量出来的,所以从测定的糖含量无法看出糖是否被破坏掉
遇到不少问题,由于以前课题组也没有人做过多糖,所以只能依靠咱们的同志帮忙了。
我首先用乙醇处理完样品,昨天用水煮了,但水提液用选择蒸发浓缩的时候,经常喷(60度,30转/min),而且水蒸发的速度特别慢。感觉水提液比较稠,颜色很深,发黑。会不会是果胶之类的影响,我打算用醇沉,但不浓缩的话,估计乙醇用量会非常大。
我今天打算把水提液直接放水浴锅里,慢慢煮,不知道这样行不行,会不会破坏多糖结构。
另外,我昨天水煮了3次之后,第四次就放在高压灭菌锅里,105度,0.04MP下处理了一个小时,不知道这样会不会破坏多糖,但测糖的量,还是蛮高的。
有同学做过多糖的 都是先醇提,然后浓缩,因为糖苷都很粘稠,蒸的时候比较困难,建议你用大一点的瓶子蒸少量多次!那样最好!
很多多糖在高温下是会降解的,之所以高温处理还能测得含量很高,是因为你测的是葡萄糖的量吧,多糖降解成单糖或寡糖,肯定还是能测出来的
多糖做结构提取的时候温度就不能过高,你用煮的,就不行了。
我70℃提的。
之后浓缩液没有出现你的情况。
提取温度高虽然提取较完全(以葡萄糖计),但是对大分子多糖的结构势必有影响的,你说呢?
多糖蛋白含量高的话就会喷。我也遇到过,你在旋转蒸发时压力不要太大,等快到最大压力时打开旋钮进气,稍微放一点气,如果压力迅速减少的话就再拧上,如此几次有时就会好转。将透气阀拧到某个位置正好达到想喷不喷的时候也可以的,这时候压力不是最大,但蒸发速度也是可以的。另外也可先把压力上去,温度先调到20度,旋转一会后慢慢上调几度,逐渐上升到60度,这样也会防止喷的。
大家的帮助,另外我想知道,我这样用沸水浴浓缩的话,糖链会断裂到什么程度,仅仅是多糖聚合度下降吗,还是大部分降解成单糖了。
不会断裂很多的,只是少部分断裂了。你可以测定分子量试试看。大部分还是好的
不同的糖性质不同,有的多糖遇热高温就会断链,因此你最好查一下相关性质,再做工艺决定,另外就算多糖被破坏了成为单糖也会被测量出来的,所以从测定的糖含量无法看出糖是否被破坏掉