请问葡聚糖凝胶LH-20的使用!小弟首次使用,凝胶,请问可以用氯仿-甲醇混合溶剂冲吗?各种溶剂的凝胶柱分离化合物有没有什么优势,要注意些什么?请高手指点!
先谢过!
可以用氯仿甲醇冲，此时为正相系统，适用于极性小的样品，但是必须在溶剂中充分溶胀后上柱。
流动相如果想梯度的话要慢慢过渡，否则可能因为比例改变过大造成凝胶的收缩。
极性大的样品可以用甲醇水溶剂系统。
注意：
1.样品用最少量的流动相溶解，一定要过滤；
2.最好是湿法上柱；
3.控制流速，馏分最好细接，如1/10或1/20保留体积
4.柱子尽量长一些
Sephadex LH20 洗脱溶剂
Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
样品的处理和洗脱溶剂的选择
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
分离的技巧
（1） 流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。
（2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。
（3） 馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。
（4） 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。
（5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质
（6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量文献参考。
（7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。
我太菜实在看不出来不过最近我也分到一个黄酮类的 结构也很奇怪，不过个人感觉楼主的不是黄酮类呢再研究研究
感谢所有的同志,还是用得不好.
与葡聚糖凝胶G不同的是，LH20能用有机溶剂。其他一切同常规层析。
可以用氯仿甲醇一起溶胀装柱的，我上个月刚装过一个20多克的柱，甲醇与氯仿对LH-20的溶胀比都是4.1左右，挺均衡的。
感谢你
学习了
先谢过!
可以用氯仿甲醇冲，此时为正相系统，适用于极性小的样品，但是必须在溶剂中充分溶胀后上柱。
流动相如果想梯度的话要慢慢过渡，否则可能因为比例改变过大造成凝胶的收缩。
极性大的样品可以用甲醇水溶剂系统。
注意：
1.样品用最少量的流动相溶解，一定要过滤；
2.最好是湿法上柱；
3.控制流速，馏分最好细接，如1/10或1/20保留体积
4.柱子尽量长一些
Sephadex LH20 洗脱溶剂
Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
样品的处理和洗脱溶剂的选择
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
分离的技巧
（1） 流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。
（2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。
（3） 馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。
（4） 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。
（5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质
（6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量文献参考。
（7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。
我太菜实在看不出来不过最近我也分到一个黄酮类的 结构也很奇怪，不过个人感觉楼主的不是黄酮类呢再研究研究
感谢所有的同志,还是用得不好.
与葡聚糖凝胶G不同的是，LH20能用有机溶剂。其他一切同常规层析。
可以用氯仿甲醇一起溶胀装柱的，我上个月刚装过一个20多克的柱，甲醇与氯仿对LH-20的溶胀比都是4.1左右，挺均衡的。
感谢你
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