各位师兄师姐，我从一天然药物中提取分离生物碱，首先进行粗分了，传统的正向硅胶柱层析，氯仿甲醇洗脱，现欲进一步细分，有Sephadex LH-20和反向C-18两种填料，请问选择哪一种更好分，并且速度快，流动相应该怎么选择呢？条件如何摸索？问的有点多，感谢了！

生物碱的差异性很大，我用过C18的反向柱，你可以试试，不过最好是能在硅胶板上跑薄层先检测一下看能否分开，确定你的洗脱体系，Sephadex LH-20这个柱子不是很熟悉但是我们实验室有用这个分过多糖的，如果第一个不行你在试试这个，


C-18反相柱的洗脱条件一般是甲醇-水呀，这个的条件怎么摸索呀，要点反向板的话也没有，就是这个让我为难

之前你用氯仿甲醇初分过。极性应该不算很小。你要是实在不知道怎么选条件。可以试试从50%或者30%的甲醇水开始跑，逐渐加大比例。Sephadex LH-20是按分子大小分离的。如果你分离的成分，结构比较类似，分子量相差不多的话，分离效果不明显。我一般用它除色素效果比较好。


实验室有HPLC，它可以用来摸索反向柱层析的条件吗？

可以。操作方便一些，就是比较慢，也挺耗时间的。