最近开始进行了一下预实验，对提取所获得浓缩液分别用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及水萃取，获得了四个层，并对这四个层进行了大体的TLC及化学分析，现将各层的结果附上，展开的条件分别是：
氯仿层：CHCl3:MeOH=9:1
乙酸乙酯层：CHCl3:MeOH=3:1+2滴醋酸
正丁醇层：CHCl3:MeOH:H2O=7:5:0.5+2滴醋酸
水层：CHCl3:MeOH:H2O=4:6:1.5+2滴醋酸
图片为四块薄层板合并的，从左到右依次是硫酸乙醇显色、Fecl3显色、25%磷钼酸显色、溴酚蓝显色
Molish反应全部层均阳性，盐酸镁粉反应在乙酸乙酯层和正丁醇层阳性，并且乙酸乙酯层颜色很重
现在想对这四个层进行分离，感觉里面酚酸类、黄酮类、三萜或甾体类的糖苷很多，于是想分析一下合适的方案，现在自己提出的方案如下：
（1）氯仿层：采用制备薄层取得四个主斑点
（2）乙酸乙酯层：成分较多，采用硅胶柱大梯度洗脱（氯仿：甲醇=100:0、100:1、100:2、100:3、100:4、100:5、100:6、100:7、100:8、100:9、10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、纯甲醇、水）结合Sephadex LH-20
（3）正丁醇层：成分较多，硅胶柱大梯度洗脱（氯仿：甲醇=100:0、100:1、100:2、100:3、100:4、100:5、100:6、100:7、100:8、100:9、10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、纯甲醇、水）结合Sephadex LH-20、反相ODS柱色谱反复
（4）水层：反相ODS柱色谱或制备薄层取得三个主斑点

但是上述方案总觉得不完善，欠缺很多东西，求高手指导！拜谢！

氯仿层



乙酸乙酯层



正丁醇层



水层

1.先告诉你，氯仿层不可以用制备薄层的方式拿到那四个点。因为那四个点有可能代表了四种极性相近的一类物质，最好的办法就是用hplc看看含有多少东西。所以这一层的物质，一样也得反复柱层析才能搞定。
2.乙酸乙酯层有必要把梯度跑的那么细吗？你可以用薄层板都试一遍，你自然就知道哪些梯度可以跑，那些梯度根本就不用跑。
3.正丁醇层建议你先用大孔树脂过一遍，除除糖一类的物质，不同比例的醇系脱下来的物质收集后，再点板摸条件，上硅胶柱。如果你试验条件非常好的话，建议这层直接用ODS填料处理。效果比大孔树脂还好。
我的经验是，不要被薄层板的假象给迷惑了。等你过完第一遍硅胶柱时，你会发现，薄层板上多了很多你在预实验的时候都没发现的点。
想分化合物的话，就得不停的过柱子，不停的点板，没啥捷径可走。
4.水层嘛，处理方式同正丁醇层没区别。

同意的说法，氯仿层我过硅胶柱分离得到的，反复几次很容易就出来了，没有别的方法。
正丁醇相我也在做，现在在用大孔树脂富集，