请问各位前辈，我现在过大孔树脂柱，除糖以富集黄酮，上样后用10倍体积的蒸馏水冲柱（糖应该大部分都冲掉了吧？），然后直接用100%的甲醇冲，收集甲醇液浓缩，结果树脂柱中出现大量气泡（这也算是正常吧，据说只是影响流速），关键是收集的甲醇液出现浑浊，不同的样品浑浊程度也有差异，求解释？？？


树脂用乙醇泡了24小时，之后洗至无醇味，然后酸碱处理了，（但不是上完每个样之后都再生处理，因为是一根小柱，1.5*30cm,所以我上完两个样之后再生处理一次；），上柱又用水冲洗了5BV,之后上样，用水冲。请问上样之前必须先用甲醇冲洗吗？


，我过柱子主要是为了除糖，不细分黄酮，得到总黄酮就行，也得这样一点一点加梯度吗？然后收集所有梯度的洗脱液合并浓缩？

树脂出现大量气泡是因为溶剂梯度变化太大，树脂溶胀不同导致，还可能会断层，如果坚决用这样的溶剂洗也没办法；出现浑浊我认为可能是树脂没处理干净，还有其本身的有机溶剂残留，可以闻闻有没有有机味

梯度太大了！！就算你在烧杯中把纯甲醇与水 混合 都会产生气泡的 大孔是否为新的？预处理了没？还可能 棉花没塞好


树脂用乙醇泡了24小时，之后洗至无醇味，上柱又用水冲洗了5BV,之后上样的啊？那这样得到甲醇部分，浓缩定容后，0.22的微孔滤膜能除去浑浊杂质吗？

因为大孔树脂的上柱顺序是从极性由大到小，洗脱溶剂一般依次为水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90乙醇等。然后再依照实际情况上其他柱进行继续分离过程。醇水梯度变化太大会产生大量气泡。树脂预处理不好时会产生浑浊。


泡完之后应该先用95%乙醇洗至无有机味，可以在流出的液体中加5倍量的蒸馏水，直到不出现浑浊，然后再用水洗至没有醇味。微孔滤膜只能除去0.22以上的较大分子，应该除不去，但也可以试试


分离总黄酮时，先用水洗掉多糖，再用70%左右的乙醇洗脱就可以了

干嘛用极性那么强的甲醇，而且还是纯甲醇。如果你想稳妥点的话，可以采用乙醇梯度洗提：20%、40%、60%、80%进行洗脱，收集不同浓度的洗脱液。