我目前是用Q-sepharose-FF凝胶柱分离海藻多糖,但是因为上样量太小得到的样品太少,没有办法继续做下一步的活性试验。浓度太大的话,多糖又会结冻无法分离,有什么办法可以加大上样量么?~
可以换个大一点的柱子吗
Q-sepharose-FF为强阴离子交换型凝胶,对上样体积要求不高,上样溶液可以配稀点,这样只有水洗脱部分会拖得较宽,对后面盐或缓冲液洗脱部分影响不大。我曾经用70ml柱床体积的填料上样1g也没过载。
水溶上样,用水洗脱至无糖洗出,再换用缓冲液或盐溶液洗脱,水洗脱下来的是不被交换的中性糖,带离子的糖是不会被水洗出的,除非上样过量交换吸附不完的才会被水洗出
恩,明白了,你说的75ml柱床体积是多粗的柱子呢?
你怎么确定没有过载,如果蒸馏水洗脱有中性糖的话,怎么确定不是酸性糖
可以换个大一点的柱子吗
Q-sepharose-FF为强阴离子交换型凝胶,对上样体积要求不高,上样溶液可以配稀点,这样只有水洗脱部分会拖得较宽,对后面盐或缓冲液洗脱部分影响不大。我曾经用70ml柱床体积的填料上样1g也没过载。
水溶上样,用水洗脱至无糖洗出,再换用缓冲液或盐溶液洗脱,水洗脱下来的是不被交换的中性糖,带离子的糖是不会被水洗出的,除非上样过量交换吸附不完的才会被水洗出
恩,明白了,你说的75ml柱床体积是多粗的柱子呢?
你怎么确定没有过载,如果蒸馏水洗脱有中性糖的话,怎么确定不是酸性糖