大家好，我最近做了一个硅胶柱层析的实验，用的柱子很小，是2*20cm的，上样上了0.75g。用淋洗剂梯度洗脱，每管收集的样品都是基本无色。在这种情况下我还能用TLC跟踪监测吗？还是要选择别的方法？比如紫外扫描，具体我也不懂。望指教。

首先要了解你的样品, 大概用什么极性的洗脱剂能洗脱出来, 馏分当然要用TLC了, 还有确定你的洗脱剂极性够么,

是要用TLC跟踪的，溶液无色不代表没有化合物。TLC点板以后，紫外检测和显色剂检测。如果点不出来的话，把样品浓缩一下再点看看。可能你的柱子上得大了，每个流分出来的东西少，所以没法显色。


请问我做分离纯化粗分大约用多大的柱子才好呢？柱体积和上样量之间有什么关系？




那要看你的样品量了。粗分的话我一般是硅胶：样品1:1拌样，硅胶柱装柱硅胶为上样量的15~20倍左右。常用的硅胶H视密度为10g/30ml 可以作为装柱时的参考。

TLC试一试，另外也可以直接进液相

如果可以你先查一下你的那个东西结构、溶解性怎样，还有多看看文献可以大致确定极性是多少。粗分的话，如果有时候会经过萃取这个步骤，你可以通过它是从哪个萃取层（如石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层等）得到的来判断样品的极性。如果看不到东西的话每一个点就点多一些嘛。 拌样的话，样品：硅胶 1：1到1：3都可以，装柱的话样品：硅胶1：10~1：20都可以。。你是粗分，硅胶甚至可以少弄点，弄多的话大柱子走的时间长，花的时间多。

可能你东西还没冲下来，需要在调整下洗脱液极性；也可能东西已经出来，但溶液本身呈无色，还是需要TLC来监测验证的。曾经分过的好多东西溶液就是无色的。