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聚酰胺装柱,洗脱

时间: 2012-06-14 11:57:16 作者: 来源: 字号:
本人第一次用聚酰胺柱子,实验室有聚酰胺粉,之前网上也看了参差不齐的资料。想知道整个流程是怎么做的。我现在醇提100g生药样品,然后用10g聚酰胺粉拌样,现在是想知道怎么装柱,要用聚酰胺粉多大量,然后是怎么上样,怎么洗脱?
详细解答者以金币重赏。

新买的聚酰胺
取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡,不断搅拌,除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱,洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣(或极少残渣)。再依次用2-2.5倍体积5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱,最后用蒸馏水洗脱至pH中性,备用。

1、装柱:一般将颗粒状聚酰胺混悬于水中,使其充分膨胀,然后装柱,让聚酰胺自由沉降;当用非极性溶剂系统时候,则用组分中低级性的溶剂装柱。
2、稀释适当浓度上样:一般每100ml聚酰胺上样1.5-2.5g,样品先用洗脱溶剂溶解,浓度为20%-30%。水溶性化合物直接上样;若提取物水溶性不好,则用挥发性有机溶媒溶解、拌适量聚酰胺、挥干或减压蒸干、干法装入柱顶。

3、水洗:先用水洗脱。
4、醇洗:在水中递增乙醇浓度至浓乙醇溶液,或氯仿、氯仿-甲醇,递增甲醇至纯甲醇洗脱。若仍有物质未被洗脱,可用稀氨水或稀甲酰胺溶液洗脱,分段收集。
5、找到最佳吸附比:先小量试验找到最佳吸附比。
6、放大:根据小试及最佳吸附比进行放大试验。
7、聚酰胺的回收:使用过的聚酰胺一般用5%氢氧化钠溶液洗涤,然后水洗,再用10%醋酸液洗,然后用蒸馏水洗至中性,即可。

聚酰胺柱层析的不足:
比如机械强度不大,
粒度不均匀,分离时流速较慢
一些小分子杂质混入的问题
采用的解决方案有:
1.装柱前先过筛
2.装柱时用5%甲醇或10%盐酸预先除去小分子杂质
3.与硅藻土混合制粒以增加机械强度。

很简单:

找一根中等大小的柱子,对于装多样聚酰胺,不必拘泥于课本教材上说的那么严格,大概有40厘米长或者30厘米长内径大于5厘米小于10厘米的柱子,拿聚酰胺袋直接装就是了,边装边用洗耳球在柱顶敲打,以便装实,看装的差不多了,在把你所拌的样品装上,离磨口有2-3厘米即可,放一层棉花,套上即可。

然后用水洗2-3个体积,各部位都可洗脱3-4个柱体积,即可。如果洗不干净,多洗几个柱体积,随机变化。
下来就是10%或者30%,40%。50%,70%。90%,乙醇水梯度洗脱,至于如何选梯度,自己决定,,
收集各部分,浓缩即可


这个不行啊,看到的都这样,有没有具体到多少g的,我都不知道怎么算拌样比,而且流速是多少呢?


你这种是干法装柱吗?就跟干法装硅胶柱差不多吗?我有个疑问,你已经把样品装进去了,为啥还水洗那么多体积然后再洗脱,不怕样品被洗掉吗


梯度当然是先水洗,在醇水梯度洗脱了,
聚酰胺是乙醇的洗脱能力大于水的系统能力···OK?


学校里的实验室,真的是害人啊····和真正的实际应用·确实好好摸索吧


你不是工艺研究吧?不需要这么讲究,做几次就好了。干法上样和硅胶差不多

哪有这么复杂,没必都要按书的弄。你就用水湿法装柱,然后不停的先用水洗,注意要洗到没有聚酰胺粉末出来为止。


好,

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