我想分离黄芪中的黄酮类物质，采用的是硅胶柱层析先砍断粗粉。薄层选的展开剂时别人推荐的氯仿/甲醇。做了个6:1的，RF值分别为0.13,0.21,0.35,0.75。
1.我想用梯度洗脱，梯度开始的浓度是不是板上只有一个点，RF值为0.2左右时的展开剂比例就可以作为淋洗剂的起始比例啊？也就是把RF值0.75压到0.2时的比例。
2.我自己过了个小柱子试了试，柱子是2*20的，湿法装柱，干法上样1.3g。洗脱梯度为氯仿--氯仿：甲醇99:1---25:1---10:1--6:1，洗脱到25:1时还有分段，但到10:1时分段渐渐重合了。到6:1就好像一大滩没分离的原样品直接就下来了。而且柱子里的硅胶像被溶解了似的变得透明，到7:3时滴下的溶液就呈现浑浊现象了。所以我就终止了实验。。。
求解释。。。。求解决。。。

你极性升的太快了……应该用小极性（25/1）的多冲一会，拿到一个产物点之后再换极性大一点的洗脱剂。DCM和氯仿过柱子都会变透明的，甲醇含量多了会溶解一些硅胶。过柱子不能急，看情况慢慢加极性。

还有，实验要坚持拿到结果的，别没结果就终止实验。嗯嗯，过柱子的时候多点点板，看板上的情况。

你25:1可以时间长一点，得耐心，或者你用20：1先爬板试试能不能降到0.2或0.3左右，氯仿过柱子就是透明的，没有溶解，就是这样的

洗脱剂在25:1时有分层就可以慢慢的让它下来啊收集不同的层液 点板看看会不会跑同一点直到没的东西了再换极性

梯度洗脱时，同一比例也应当分部收集，一般我以柱体积的一半收集，然后点板分析合并，多做点就有经验了！

变透明不是溶解，是因为有氯仿


谢谢。那我选择洗脱剂的方法是对的吗？以下是我过柱子的照片，
。中间部分那一块一开始是显示分层的，从25:1到10:1再到6:1的时候分层就不见了。都聚集到一块了，然后就全一块洗脱下来了。。

你极性升的太快了……所以会一起洗下来。过柱子不能急，看情况慢慢加极性。


谢谢你哦。。。我打算重新过一下柱子。。到时候再请教你