硅胶柱层析

一根柱体积大概400 ml的柱子

大家一般多少量一接？

洗脱系统恰当的话大概接多少瓶左右呢？

PS:
寻做甾体皂苷类成分 提取分离的虫友
交流学习下经验

见附件



建议你：20ml接一瓶。tcl在线检测。用混合溶剂洗脱。

建议对混合物进行硅胶柱层析时，接收流份的体积还要考虑样品的复杂程度！

这么说吧，甭管多大的保留体积，都可以半个保留体积一接，你400的就200一接。一个梯度一般4-8个保留体积，也就是一个梯度8-16个。
当然可以根据你点半摸条件情况而定，比如你的样品集中在某一个或者两个梯度下来的话，这两个梯度就可多跑几瓶，如8个保留体积，已经很多了；其他梯度的可以少跑几瓶，如4个保留体积。
看你的意思你的样品量应该不少，应该属于粗分，粗分的话完全没必要每个梯度都跑很多，一是浪费时间，二是后处理麻烦。个人认为粗分的话起到砍断的目的就行了！
个人意见，仅供参考！

样品量少啊原来。那柱体积400？你是想装长柱子把这两个点分开吗？若是这样，我以前也遇到过类似的样品，当时想的也是把柱子装长一点期望分开，但效果不太理想，后来想柱子长了理论塔板数是多了，同时峰展宽现象也会严重。当然了，这也和样品的性质有关，这个就没准了！
如果你选定用硅胶柱分的话，建议硅胶选用H，摸一个保守的起始条件，等度洗脱。TLC点板跟踪，样品下来的时候那几个流分每瓶少接点（有人说甚至可以每瓶2-3毫升）。还有你样品量少，柱体积怎么大到400了，不可想象！！！
另外，可以试一下开放ODS，正相分不开的东西，没准反向分离效果很好的；或者你确定样品就两个点的话（样品相对来说干净），可以直接上液相分啊！
或者你根据你这两个点在TLC板子上的情况，如254nm，365nm吸收情况，或者显色剂显色情况，如果两个点在板子上的情况不同，说明不是一类物质，可以考虑用凝胶分离。
我想到的就这些常用的经验吧。还有硅胶多少会死吸附样品的，而ODS和凝胶基本上是无损失的！看你要分离的样品到底有多少量。
还是个人意见，仅供参考！


谢谢你的热心回答
我分的甾体皂苷成分 大概母核接4个糖左右 然后区别很可能就是糖种类不同
或者母核一个羰基 一个羟基这样的区别

ODS 制备柱都试过
还是自己做的毛糙了
谢谢你的提示
今天整理下思路改正了一些方法
有问题再想你请教谢谢~！

接糖的个数或种类不同可以试下凝胶柱，
凝胶对样品也没有损失

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