大家好，我在用反向柱层析细分生物碱，柱子规格是48cm*2cm，请问一下每个浓度梯度用多少的洗脱溶剂比较好，再有一个问题就是，我将同一个梯度洗脱下来的溶液点样是相似的一个点，然后把它们合并浓缩了之后再点样怎么又变成多个点了呢？

回答你第二个问题
洗脱液合并后再点样，又变成两个点，是因为你把溶液浓缩了，原来溶液中就有，但是浓度很低，点样看不到而已

那东西稳定不？浓缩过程也有被破坏的可能啦···


这个确实好这样的，但是我要怎么样做才能避免这种情况，而只得到纯的化合物呢？

一般两个柱体积就可以了，你要边做边跑TLC观察，这样比较好


如果有制备液相的话，这种情况不需要避免，制备时候大点小点都拿，过于追求用柱子拿单点反而会损失很多可以拿到手的化合物

在点样时要注意所点样品的浓度，浓度太高太低都会影响点样的结果

细分生物碱，建议用正相硅胶柱层析，反相不适合分离极性中等及极性小的化合物。
关于一个点变成两个点，可能本来就是两个成分，只是极性很接近，点的位置接近。有点板只有一个点却能分出几个成分出来的实例。