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梯度洗脱时主峰后端基线上漂严重怎么办?

时间: 2012-04-15 01:51:01 作者: 来源: 字号:
检测一个片剂的有关物质。液相色谱条件为:

色谱条件与系统适用性试验 采用含量测定项下的色谱条件与系统适用性试验,应符合要求。以乙腈-水-醋酸(57:43:1)为流动相A,乙腈-水-醋酸(90:10:1)为流动相B,在30分钟内使流动相A的比例由100%到0,流动相B的比例由0到100%(调整流速使坎地沙坦酯出峰时间约为12分钟),分析时间从溶剂峰后算起约为坎地沙坦酯峰保留时间的2.5倍。
测定法 取本品10片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于坎地沙坦酯4mg),精密加入乙腈-水(3:2)溶液10ml,超声处理10分钟,过滤,取续滤液,作为供试品溶液。另精密称取坎地沙坦酯对照品约10mg,置50ml量瓶中,加乙腈适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置50ml量瓶中,加乙腈-水(3:2)溶液稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,按外标法以峰面积分别计算各有关物质的量。

先后在两台不同的仪器(同是岛津的LC-20A系统,差不多同时买的),首先在A机上空白溶剂、对照溶液出峰都正常,但样品溶液在主峰后基线上漂比较严重;同样的流动相和色谱柱换到另一台B机上后样品溶液主峰后基线就不怎么漂了,很正常,中间还将A机的检测器替换到B系统上后出峰也很正常。

后来还是在A机上复检,先后通过用异丙醇冲洗系统,定量环清洗并超声处理,将B系统中的进样阀前后端的管路及混合器替换到A中以及关闭空调后情况依然如故,请高手救急。具体的色谱图如下:












主要是由于A与B溶剂的紫外吸收差异所致

在反相体系中,B浓度在分离期间是增加的,有机溶剂的紫外吸收总是大于水,所以就。。。

另外,一般是通过那个所谓的“吸收匹配”来消除的

而且也要注意乙酸的纯度,以及配置一致性问题,还有就是样品配制也要注意下

另外,问题也要控制一下




基线漂移应该还是系统不干净吧。小弟一点愚见。是否可以将整个系统不连柱子进行冲洗呢?




排除了流动相,色谱柱,检测器,温度的差异了,仪器型号也是一样,那么,会不会是柱外效应呢?比如,连接的管线过长导致拖尾?





已经不连柱子(二通取代柱子)的情况下用异丙醇冲洗过了





呵呵 连接的管线用出峰正常的那台机里的管线替换过还是老样子





问题在于我用同样的流动相、同样色色谱柱和同样的样品溶液只是在不同的仪器里检测,一台正常,一台就出现主峰后端基线上漂严重的问题





如果你的都是肯定的

我回答也是肯定的,那是检测器的问题,比如灯能量问题




在B机(出峰正常)检测的过程中,确实发现一个现象:B机的样品池和参比池的能量达到1300左右,而A机的只有1000左右,所以中间曾经将A机(基线上漂)中的检测器整个替换到B机中检测,结果样品溶液出峰也正常(与B机检测器未更换前基本一致),所以应该排除了检测器的影响了





环境是否一样?温度啊,是否对风口啊,是否接地啊,有无振动什么的




通过你发的图,我猜是仪器管路的死体积引起,(可能你会说对照为什么没漂)由于对照浓度比较低,图谱上不是很明显,你把对照放大,会发现其实对照也漂的。




先前是开空调的,复检时关闭了空调,检测池恒温到30℃依然如故;接地都有的,振动可以排除




中间替换过检测正常的机器里的管路过来,问题还是没有解决




死体积是在连接过程中产生,跟管路本身没关系,如柱子的接头,你如果采用PK接头,连接的时候你要是不注意,就容易产生死体积




我感觉你在A机上做的对照和样品基线漂移程度基本一致,因为在30min结束时对照和供试品溶液基线都略高于2.5,梯度洗脱本身就存在基线漂移的问题,如果想对照溶液和供试品溶液,或者每一针之间都完全一直,那是不可能的,世界上没有两片完全相同的树叶吗。况且目前的漂移丝毫不影响你的定量。仪器和仪器之间有差别这也很正常,仪器内管路也不可能做到完全一样,而且你的两台仪器之间漂移程度差别不大,没有像你说的一个漂移严重一个正常。




我感觉你在A机上做的对照和样品基线漂移程度基本一致,因为在30min结束时对照和供试品溶液基线都略高于2.5,梯度洗脱本身就存在基线漂移的问题,如果想对照溶液和供试品溶液,或者每一针之间都完全一直,那是不可能的,世界上没有两片完全相同的树叶吗。况且目前的漂移丝毫不影响你的定量。仪器和仪器之间有差别这也很正常,仪器内管路也不可能做到完全一样,而且你的两台仪器之间漂移程度差别不大,没有像你说的一个漂移严重一个正常。




这种情况,我试验时也遇见过。同一台液相,开始试验,空白基线很平稳。后来,这台液相做了其他品种。再走同样梯度后,空白基线飘的厉害,比这个还严重。用异丙醇甚至用低浓度硝酸清洗后,依然存在。后来,用这个梯度,反复多同样梯度清洗了多次,突然就好了。

可能原因,液相管路脏了,有缓冲盐等。
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