各位好，做了瑞格列奈的左旋异构体测定烦死啦，大家帮帮忙。按药典的方法配制流动相，柱子是大赛璐的AGP，按药典的程序跑梯度，分离度达到要求。可是瑞格列奈峰出峰太早了，约2.3min，峰型不好，理论板数才八百多，达不到要求（要求2000）；左旋峰型很好，理论板数高。我调了下程序，把水相比例增大，出峰时间能调到3.4左右，瑞格列奈峰型可以，理论板数还是低，并且重现性差，每针的出峰时间都逐渐往前移，从3分钟逐渐移到2.5分钟，大家帮找下原因




增加预柱，可以保护柱子，降低流速应该对你的检测很有帮助，你的流速应该在1.0ml/min。建议减少到0.5ml/min同时延长检测时间。这个蛋白柱和正常的色谱柱不同，流速越低柱效反而会上来。




大赛璐可以提供免费试条件，你把样品给他们寄点过去，他们会把实验图谱给你们返回来，如果他们做的没问题，很可能是你们的柱子不行了，要不就是操作上有问题。




这个柱子一定要用纯水冲后，才能做试验，严格按照他说明书说的方法预平衡柱子，如果不行，就按他说的方法好好冲冲柱子，我们曾经也是做不出来，后来冲过之后，做出来了




调整流动相后平衡时间是否足够，个人觉得可能是平衡时间不够造成。对于塔板数不合要求，是否可以考虑用其他型号的柱子。