各位战友
大家好！最近遇到比较棘手的问题，就是“鞣花酸含量测定”，它让我很烦恼，如果哪位战友曾经采用HPLC法测定鞣花酸，有这方面的经验的话，请多多指教，下面我先谈谈我做鞣花酸遇到的问题吧。
曾经采用多种色谱条件或换柱子（柱子都是新买的）进行测定，均未收到预期结果。结果都是对照品峰严重拖尾，柱效不高，峰很宽，无法满足要求。此外可以排除柱子和液相系统问题。
曾采用的方法如下：
对照品溶液配制：采用甲醇溶解至刻度。
色谱条件1：、
戴安p680高压液相色谱系统，新色谱柱：1una C18(2 ) 5µ 250×4.6mm 流动相：0.5％醋酸-乙腈（15:85），检测波长为254nm。
结果：对照品峰严重拖尾，柱效不高，峰很宽，无法满足要求。
色谱条件2：
戴安p680高压液相色谱系统，新色谱柱：waters（xbridge） C18(2 ) 5µ 250×4.6mm 0.5％醋酸-乙腈（15:85）或 0.1％磷酸-乙腈（15:85）
结果同上。
色谱条件3
戴安p680高压液相色谱系统，新色谱柱：安捷伦zobax sb C18(2 ) 5µ 150×4.6mm 0.5％醋酸-乙腈（15:85）或 0.1（或1.5）％磷酸-乙腈（15:85）
结果依旧同上。
色谱条件3（参考文献做）
参考相关文献结果，均无法收到预期结果，再后来采用磷酸盐缓冲盐体系并有不断调节pH，从4.0调节到1.0左右（用的是xbridge，宽pH范围），均无法使对照品的峰达到要求。
此外，有文献报道：色谱条件:ODS HYPERSILC18柱(100 mm×4.6mm,5μm),柱温40℃,用0.05 mol/L CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(体积比44∶2∶54)作为流动相,检测波长为254 nm。做出峰形等相当好，不过无法理解流动相配制，请各位战友帮忙理解一下，到底应该怎样配制这个流动相。
本方法适用于SymMatrix原料中鞣花酸的含量测定。
2.仪器
2.1 岛津2010液相色谱系统或相应的液相色谱系统，UV或DAD检测器。
2.2 色谱柱 ZOBAX Extend C18，250×4.6mm，5um 。
2.3 0.45um 针式过滤器。
2.4 超声波清洗器。
2.5 50ml、100ml容量瓶。
2.6 分析天平（精确到0.0001）
3.试剂及色谱条件
3.1 磷酸（分析纯）
3.2 甲醇（分析纯）
3.3 乙腈（色谱纯）
3.4 蒸馏－去离子水（蒸馏水经MILLI－Q离子交换纯水系统处理水）。
注：试剂的配制和分析步骤中均使用此水。
3.5 流动相：1.2%磷酸水溶液：乙腈=85：15，根据柱子性能可适当调整。
检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃。
3.6 鞣花酸对照品由Fluka提供,含量：96.0%。
楼主用的3个流动相体系都是醋酸和磷酸体系，好像没有使用磷酸缓冲盐
对照品不会有问题吧？
只是单纯的对照品峰型不好？现在出峰多少分钟？峰很宽？暂时不考虑分离度，可以选择短柱子试试也许好点
找到合适的色谱柱后，调节ph，多试试
如果有保护柱，记得先卸下来
有没有试过对照品溶液用流动相配制？ 有时用流动相配制效果会不一样的，可以考虑试试哦
嗯，同意楼上的意见，有无安保护住，峰的结果也不一样；前段时间做的一个品种就是安了保护住，峰型不好；后来卸下来就好了
借用这个帖子请教一下：我只想做鞣花酸的TLC，但很难找到合适的溶剂啊，这东东可难溶了，上面说的用甲醇好象溶解度也很小，有高人做过吗，望指点一二！先谢过！
用盐试试
你好,是说用Na2CO3溶液吗,浓度?点板不会很难干吗?
你好，总算找见战友了，我也想做鞣花酸的薄层鉴别，条件怎么都试不出来，可以给个建议吗？先谢啦
鞣花酸及其衍生物的普遍特点：
1）常规溶剂溶解性较差或很差；
2）TLC大多难以显色或不显色；
3）HPLC大多拖尾严重。
如果仅仅是检测纯度的话，1H-NMR（DMSO-d6）是最可靠的，既有纯度信息又有结构信息。
那你的意思是鞣花酸的薄层鉴别就没有好一点的方法吗？想做质量标准就需要这一块呢
由于检测手段灵敏度不高，检测结果的可靠性也就不高了，这是由该类成分的结构特点决定的。
谢啦，定性我们有HPLC呢，就像结合薄层的定性，可是真的好难做啊
HPLC本身是高灵敏度检测设备，但是对于大极性酚酸类化合物就不那么灵敏了。
预算充足的话，可以找找有没有对该类成分专一性的柱子；
不是很宽裕的话，那就只能多尝试不同的缓冲液体系了。
大家好！最近遇到比较棘手的问题，就是“鞣花酸含量测定”，它让我很烦恼，如果哪位战友曾经采用HPLC法测定鞣花酸，有这方面的经验的话，请多多指教，下面我先谈谈我做鞣花酸遇到的问题吧。
曾经采用多种色谱条件或换柱子（柱子都是新买的）进行测定，均未收到预期结果。结果都是对照品峰严重拖尾，柱效不高，峰很宽，无法满足要求。此外可以排除柱子和液相系统问题。
曾采用的方法如下：
对照品溶液配制：采用甲醇溶解至刻度。
色谱条件1：、
戴安p680高压液相色谱系统，新色谱柱：1una C18(2 ) 5µ 250×4.6mm 流动相：0.5％醋酸-乙腈（15:85），检测波长为254nm。
结果：对照品峰严重拖尾，柱效不高，峰很宽，无法满足要求。
色谱条件2：
戴安p680高压液相色谱系统，新色谱柱：waters（xbridge） C18(2 ) 5µ 250×4.6mm 0.5％醋酸-乙腈（15:85）或 0.1％磷酸-乙腈（15:85）
结果同上。
色谱条件3
戴安p680高压液相色谱系统，新色谱柱：安捷伦zobax sb C18(2 ) 5µ 150×4.6mm 0.5％醋酸-乙腈（15:85）或 0.1（或1.5）％磷酸-乙腈（15:85）
结果依旧同上。
色谱条件3（参考文献做）
参考相关文献结果，均无法收到预期结果，再后来采用磷酸盐缓冲盐体系并有不断调节pH，从4.0调节到1.0左右（用的是xbridge，宽pH范围），均无法使对照品的峰达到要求。
此外，有文献报道：色谱条件:ODS HYPERSILC18柱(100 mm×4.6mm,5μm),柱温40℃,用0.05 mol/L CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(体积比44∶2∶54)作为流动相,检测波长为254 nm。做出峰形等相当好，不过无法理解流动相配制，请各位战友帮忙理解一下，到底应该怎样配制这个流动相。
本方法适用于SymMatrix原料中鞣花酸的含量测定。
2.仪器
2.1 岛津2010液相色谱系统或相应的液相色谱系统，UV或DAD检测器。
2.2 色谱柱 ZOBAX Extend C18，250×4.6mm，5um 。
2.3 0.45um 针式过滤器。
2.4 超声波清洗器。
2.5 50ml、100ml容量瓶。
2.6 分析天平（精确到0.0001）
3.试剂及色谱条件
3.1 磷酸（分析纯）
3.2 甲醇（分析纯）
3.3 乙腈（色谱纯）
3.4 蒸馏－去离子水（蒸馏水经MILLI－Q离子交换纯水系统处理水）。
注：试剂的配制和分析步骤中均使用此水。
3.5 流动相：1.2%磷酸水溶液：乙腈=85：15，根据柱子性能可适当调整。
检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃。
3.6 鞣花酸对照品由Fluka提供,含量：96.0%。
楼主用的3个流动相体系都是醋酸和磷酸体系，好像没有使用磷酸缓冲盐
对照品不会有问题吧？
只是单纯的对照品峰型不好？现在出峰多少分钟？峰很宽？暂时不考虑分离度，可以选择短柱子试试也许好点
找到合适的色谱柱后，调节ph，多试试
如果有保护柱，记得先卸下来
有没有试过对照品溶液用流动相配制？ 有时用流动相配制效果会不一样的，可以考虑试试哦
嗯，同意楼上的意见，有无安保护住，峰的结果也不一样；前段时间做的一个品种就是安了保护住，峰型不好；后来卸下来就好了
借用这个帖子请教一下：我只想做鞣花酸的TLC，但很难找到合适的溶剂啊，这东东可难溶了，上面说的用甲醇好象溶解度也很小，有高人做过吗，望指点一二！先谢过！
用盐试试
你好,是说用Na2CO3溶液吗,浓度?点板不会很难干吗?
你好，总算找见战友了，我也想做鞣花酸的薄层鉴别，条件怎么都试不出来，可以给个建议吗？先谢啦
鞣花酸及其衍生物的普遍特点：
1）常规溶剂溶解性较差或很差；
2）TLC大多难以显色或不显色；
3）HPLC大多拖尾严重。
如果仅仅是检测纯度的话，1H-NMR（DMSO-d6）是最可靠的，既有纯度信息又有结构信息。
那你的意思是鞣花酸的薄层鉴别就没有好一点的方法吗？想做质量标准就需要这一块呢
由于检测手段灵敏度不高，检测结果的可靠性也就不高了，这是由该类成分的结构特点决定的。
谢啦，定性我们有HPLC呢，就像结合薄层的定性，可是真的好难做啊
HPLC本身是高灵敏度检测设备，但是对于大极性酚酸类化合物就不那么灵敏了。
预算充足的话，可以找找有没有对该类成分专一性的柱子；
不是很宽裕的话，那就只能多尝试不同的缓冲液体系了。