我在一新成立的生物技术公司工作，项目做大肠表达的基因工程产品，我在质量和分析方法这块也是新手，有许多问题向大家请教：
1. SDS-PAGE测定蛋白质纯度：结果依赖于脱色程度（上样量10 ug，考染）和分析软件中灵敏度的设定，如何选取标准？（我拿一种市售的标示纯度98%的蛋白作为参考，然后调灵敏度，当这个参考品为92-94%纯度的时候，我的样品就100%了……）
2. SDS-PAGE测定蛋白质分子量：软件给出的分子量-迁移率半对数图没做直线拟合，样品的分子量好像是依据Marker中最近的两个分子量连成的直线计算的（UVP的Labwork软件，天根14.4-94kDa的Marker），算出来的分子量比按氨基酸序列推算出的分子量小10%，软件的这种处理是否科学？（我从软件上获得迁移率数据，在Excel作lgMr-Rf的图，直线拟合，然后根据方程计算样品分子量，虽然直线的R2只有0.95-0.97左右, 但计算出的分子量更接近于理论计算的分子量，2%以内吧）
3. 探针杂交法DNA残留检测：1. 用加了鱼精DNA的稀释液稀释，尼龙膜上黑成一团啊~（好象论坛上也有人出现这个结果 ），这个问题怎么解决？违背药典不加？2. 在无鱼精DNA情形下实验，不做蛋白酶处理（当然对照中就没有BSA了）梯度什么都比较好，D3（0.1 ng/100 ul）也能出来，但是加蛋白酶处理酚抽提后只有D1 （10 ng/100ul）能出来了，这个问题怎么解决？
4. 无菌检查、内毒素检测结果因样品质量不同的方法如何验证或确认，需要做哪些项目？上面提到的电泳、DNA残留检测又要做哪些项目的验证？
我问题真的好多，今天就这些了，麻烦大家了……
回答关于DNA残留的问题，我用杂交方法摸索了有4个月，没有找到答案啊，后来发现picogreen是个不错的好东西，检测残留DNA超级简单，而且可以定量，建议楼主不要再次方法浪费时间啦。
请问： 楼主问题解决了吗？
DNA 残留实验杂交法最近有文章出来可以参考。药物分析杂志2011年第3期。但是现在都推崇荧光定量法。
1. SDS-PAGE测定蛋白质纯度：结果依赖于脱色程度（上样量10 ug，考染）和分析软件中灵敏度的设定，如何选取标准？（我拿一种市售的标示纯度98%的蛋白作为参考，然后调灵敏度，当这个参考品为92-94%纯度的时候，我的样品就100%了……）
2. SDS-PAGE测定蛋白质分子量：软件给出的分子量-迁移率半对数图没做直线拟合，样品的分子量好像是依据Marker中最近的两个分子量连成的直线计算的（UVP的Labwork软件，天根14.4-94kDa的Marker），算出来的分子量比按氨基酸序列推算出的分子量小10%，软件的这种处理是否科学？（我从软件上获得迁移率数据，在Excel作lgMr-Rf的图，直线拟合，然后根据方程计算样品分子量，虽然直线的R2只有0.95-0.97左右, 但计算出的分子量更接近于理论计算的分子量，2%以内吧）
3. 探针杂交法DNA残留检测：1. 用加了鱼精DNA的稀释液稀释，尼龙膜上黑成一团啊~（好象论坛上也有人出现这个结果 ），这个问题怎么解决？违背药典不加？2. 在无鱼精DNA情形下实验，不做蛋白酶处理（当然对照中就没有BSA了）梯度什么都比较好，D3（0.1 ng/100 ul）也能出来，但是加蛋白酶处理酚抽提后只有D1 （10 ng/100ul）能出来了，这个问题怎么解决？
4. 无菌检查、内毒素检测结果因样品质量不同的方法如何验证或确认，需要做哪些项目？上面提到的电泳、DNA残留检测又要做哪些项目的验证？
我问题真的好多，今天就这些了，麻烦大家了……
回答关于DNA残留的问题，我用杂交方法摸索了有4个月，没有找到答案啊，后来发现picogreen是个不错的好东西，检测残留DNA超级简单，而且可以定量，建议楼主不要再次方法浪费时间啦。
请问： 楼主问题解决了吗？
DNA 残留实验杂交法最近有文章出来可以参考。药物分析杂志2011年第3期。但是现在都推崇荧光定量法。